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动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)是心血管疾病发生主要的病理生理基础，而血浆中高水平的脂蛋白(a)是动脉粥样硬化发生的独立危险因子，但目前尚缺乏专一有效的方法下调高脂蛋白(a)病人血浆中的脂蛋白(a)水平。载脂蛋白(a)[apolipoprotein(a),apo(a)]是脂蛋白(a)的特有组成部分，大量的研究表明其合成量的高低及其分子量的大小直接关系到血浆中脂蛋白(a)的水平。因此，如何抑制apo(a)的合成，成为目前降低血浆中脂蛋白(a)的主要策略。最新的研究发现在apo(a)的启动子区域存在一个Ets-1及DR-1的结合位点，活化的Elk1及HNF4α分别与这两个位点结合从而调控apo(a)的转录。Elk1作为ERK1/2的一个下游因子其可被磷酸化的ERK1/2所激活，而磷酸化的ERK1/2还可抑制HNF4α表达。成纤维细胞因子21(Fibroblast growth factor21, FGF21)作为调节肝脏代谢的重要因子，研究表明其可以通过ERK1/2信号通路参与肝脏糖脂代谢的调节，并影响血浆中脂蛋白水平，而这些作用由FGFR1-β-klotho所介导，故FGF21存在下调apo(a)表达的分子作用潜质。因此，本研究拟探讨FGF21对HepG2细胞apo(a)表达的影响，并研究其作用机制，为研究下调血浆脂蛋白(a)的药物提供新的干预靶点。第一部分：FGF21对HepG2细胞apo(a)表达的影响目的：观察FGF21对HepG2细胞apo(a)表达的影响实验方法： HepG2细胞用高糖培养基培养，待生长融合后，换新鲜培养基培养6h使细胞同步化生长，后再加入含不同浓度的FGF21（0ng/ml、50ng/ml、100ng/ml、200ng/ml、400ng/ml）培养基培养24h；及用200ng/ml FGF21处理不同时间（0、6h、12h、24h、48h）；Real Time-PCR的方法观察apo(a)mRNA表达，用Western blot、细胞免疫组化观察apo(a)蛋白表达变化，用ELISA法检测培养基中apo(a)分泌水平。结果：与0ng/ml组相比，随着FGF21浓度的增加， HepG2细胞内的apo(a)表达及apo(a)分泌呈浓度依赖性下调，其中以200ng/ml、400ng/ml降低最为明显；与0h组相比，随着FGF21作用时间的延长，HepG2细胞内的apo(a)表达及apo(a)分泌呈时间依赖性的下调，其中以24h下调作用最为显著。小结：FGF21呈浓度及时间依赖性下调HepG2细胞apo(a)的表达及分泌水平。第二部分：FGF21影响HepG2细胞apo(a)表达的机制研究目的：探讨FGF21调控HepG2细胞apo(a)表达的分子机制试验方法：培养HepG2细胞，分别用ERK1/2信号的抑制剂PD98059或FGFR1抑制剂PD166866， Elk-1siRNA对细胞进行预处理，随后加入200ng/ml FGF21处理细胞24h。以Western blot方法检测细胞中ERK1/2、p-ERK1/2、Elk1、p-ERK1/2、FGFR1-4、HNF4α、FXR及apo(a)表达，同时运用Real Time-PCR检测细胞中apo(a)、FGFR1-4mRNA表达变化，ELISA法检测培养基中的apo(a)分泌水平变化。结果：FGF21可以明显的上调p-ERK1/2表达，抑制ERK1/2激活可以反转FGF21对HepG2细胞apo(a)表达的抑制作用；干扰Elk1及抑制FGFR1也可起到相同的效果。而抑制FGFR1可减弱FGF21对ERK1/2、Elk1激活。此外，FGF21还可抑制HNF4α的表达，但对FXR无影响，而抑制FGFR1及ERK1/2激活均可逆转FGF21下调HNF4α表达。小结：FGF21通过FGFR1-ERK1/2-Elk1通路及FGFR1-ERK1/2-HNF4α途径协同下调HepG2细胞apo(a)表达。结论：1. FGF21呈浓度及时间依赖性的下调HepG2细胞apo(a)表达；2. FGF21通过FGFR1-ERK1/2-Elk1及FGFR1-ERK1/2-HNF4α协同下调HepG2细胞apo(a)表达。