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目的:观察清热化瘀Ⅱ号方对大鼠脑缺血再灌注损伤Toll样受体3(TLR3)、TRIF相关受体衔接分子(TRAM)的影响,探讨清热化瘀Ⅱ号方对大鼠脑缺血再灌注损伤神经元保护的作用机制。 方法:将成年健康SD大鼠192只,按随机数字表随机分为两大组。每组96只随机分为4个亚组:空白组(A组)、假手术组(B组)、脑缺血再灌注组(C组)、清热化瘀Ⅱ号方组(D组)。采用二次线栓法制备大鼠局灶性脑缺血再灌注模型。各组分别作以下处理:A组自由饮食;正常饲养;B组线栓只插入颈内动脉9mm,术后正常饲养,予生理盐水灌胃;C组线栓插入颈内动脉18-20mm,术后正常饲养,予生理盐水灌胃;D组术后清热化瘀Ⅱ号方灌胃,余处理同C组。参考Longa的5分制法对大鼠进行神经功能缺损评分,B组、C组和D组大鼠分别在术后I/R2h后3h、6h、12h、24h、48h进行标本采集。取材后,常规HE染色并在光镜下观察各组脑组织病理形态学改变,应用荧光定量PCR法检测缺血侧海马区TLR3、TRAM的mRNA的表达。 结果:1. HE染色结果:光镜下A组及B组均未见神经元损伤, C组及D组有不同程度的神经元损伤,D组在各时间点的受损神经元明显少于C组;2.荧光定量PCR结果:(1)A组与B组TLR3 mRNA呈现低水平表达;C组TLR3 mRNA表达较B组明显增加,差异有统计学意义,(P<0.05);C组和D组中,在缺血再灌注3h,TLR3 mRNA表达开始增加,至24h表达达峰,48h后表达逐步下降。D组TLR3 mRNA表达活性在同一时间点相比均低于 C组,差异有统计学意义(P<0.05);(2)A组与B组TRAM mRNA呈现低水平表达;C组TRAM mRNA表达较 B组明显增加,差异有统计学意义,(P<0.05);C组和D组中,在缺血再灌注3h,TRAM mRNA表达开始增加,至24h表达达峰,48h后表达逐步下降。D组TRAM mRNA表达活性在同一时间点相比均低于C组,差异有统计学意义,(P<0.05)。 结论:清热化瘀Ⅱ号方可能通过下调TLR3、TRAM的mRNA表达,抑制TLRs/NF-κB信号通路的传导,减轻炎症级联反应,对大鼠脑缺血再灌注损伤发挥神经元保护作用。