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目的:通过研究肝癌组织中自然杀伤T细胞(Natural killer T cells,NKT)的数量分布变化与肝癌转移的相关性,进一步明确NKT细胞与肝癌疾病进展期的变化规律,为肝癌的预后判断与治疗提供科学依据,增加NKT细胞在肝脏疾病中的临床数据,为进一步探索肝脏微环境与NKT细胞之间的相互影响,提供实验依据并探索肝癌免疫治疗新方法。研究对象及方法:1、研究对象:收集青岛大学附属医院肝胆外科、普外科2016.01~2016.05年间手术切除并经病理证实的肝癌标本共64例(术前未行放、化疗),标本根据全国肝癌协会会议拟定的分期为标准进行临床分期,均经4g/L的中性甲醛固定,常规石蜡包埋,4um厚常规切片,苏木精-伊红(HE)染色和复核病理诊断。另取非肝癌手术的正常肝组织15例作为对照。2、方法:选择小鼠抗人CD3单抗和小鼠抗人CD56单抗,采用双重免疫组织化学SP法对切片进行抗原染色,DAB和AEC显色剂分别显色后,光学显微镜下分别计数在正常肝脏组织,临床不同分期肝癌组织中NKT淋巴细胞的数量及分布情况,运用统计学方法分析NKT淋巴细胞的数量分布变化与肝癌细胞迁移的相关性。切片中能同时表达CD3、CD56抗原分子的淋巴细胞为阳性NKT细胞。结果:1、15例正常肝脏组织NKT细胞单个高倍视野平均数为18.3571 8.3265,且NKT细胞多集中在门管区微血管和肝血窦内。2、28例Ⅰa-Ⅱa期肝癌组织NKT细胞单个高倍视野平均数为9.2438 2.5894,随病程进展肝脏内微环境的变化NKT细胞数量逐渐下降。3、36例Ⅱb-Ⅲb肝癌组织NKT细胞单个高倍视野平均数为7.6587 5.9854。晚期肝癌NKT细胞数量进一步下降,视野内NKT数量很少。4、肝癌组织中(未分期)自然杀伤性T淋巴细胞的数量明显低于正常肝组织内NKT细胞的数量,具有明显差异P<0.05(P=0.037)5、不同分期肝癌中Ⅰa期-Ⅱa期与Ⅱb期-Ⅲb期的NKT细胞数量有明显差异P<0.05(P=0.025),且癌细胞侵袭肝脏的程度越高,NKT细胞数量越少。结论:(1)利用不同的免疫细胞化学显色剂,分别显色NKT细胞膜上表达的CD3和CD56抗原,对NKT细胞进行识别和定位。(2)正常肝脏组织NKT细胞细胞多集中在门管区微血管内和肝血窦内。(3)肝癌组织中(未分期)自然杀伤性T淋巴细胞的数量明显低于正常肝组织内NKT细胞的数量。(4)NKT细胞数量随肝癌病程进展逐渐下降。癌细胞侵袭肝脏的程度越高,NKT细胞数量越少。