猪瘟（Classical swine fever,CSF）曾被称为猪霍乱（Hog cholera,HC）,俗称“烂肠瘟”,是由猪瘟病毒（Classical swine fever virus,CSFV）引起的一种急性、热性和高度接触性传染病。研究表明,CSFV单克隆抗体不仅能为CSFV免疫机理等研究提供帮助,还使开发新型CSFV强弱毒的鉴别检测以及CSFV同种属病毒的鉴别检测技术成为可能,因此,制备更高特异性及灵敏度的CSFV单克隆抗体意义重大。本研究首先根据CSFV石门株在PK-15细胞上的增殖规律,对CSFV石门株进行大量繁殖,并建立了稳定性较高的CSFV检测方法;随后依次使用离心过滤、膜包超滤浓缩、Sepharose 4 Fast Flow过滤层析（4FF-SEC）等方法对CSFV进行纯化。分别通过实时荧光定量RT-PCR技术、免疫过氧化物酶单层细胞试验（IPMA）等对病毒纯化效果进行评价。实时荧光定量RT-PCR结果证明病毒纯化成功,并确定过滤层析后的第一个收集峰为纯化的CSFV;经IPMA测定病毒原液、超滤浓缩液、4FF-SCE纯化病毒液的TCID₅₀结果显示,经超滤浓缩后,CSFV的TCID₅₀/mL由最初的10^4.7提升至10^6.5,病毒回收率约76.52%,超滤浓缩液经4FF-SEC进一步纯化后,最终病毒回收率为63.2%。用上述纯化的CSFV作为免疫原免疫6⁸周龄BALB/c小鼠,随后用大肠杆菌表达纯化的CSFV E0-E2融合蛋白作为包被原,通过间接ELISA测定免疫小鼠效价,免疫效价最高可达到1:25600。选取免疫效价较高的3号小鼠,取其脾脏与骨髓瘤细胞SP2/0进行融合;经ELISA方法筛选、2³次亚克隆筛选、Western Blot鉴定后获得5株可以与CSFV E0-E2融合蛋白特异性结合的阳性杂交瘤细胞株,分别命名为:5F2A7、5F2C12、8D4G7、9A1C7、11D4B6。IPMA结果显示,5株抗体均与病毒结合,其中,9A1C7与病毒结合能力最强,且不与牛病毒性腹泻病毒（Bovine viral disease virus,BVDV）、猪繁殖与呼吸综合征病毒（Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV）、PCV2（Porcine circovirus type 2,PCV2）发生反应。经鉴定,9A1C7具有稳定分泌单克隆抗体的能力;单抗亚型为IgG2c,轻链κ型。将9A1C7杂交瘤细胞株接种小鼠腹腔制备腹水,通过正辛酸-硫酸铵法对收集到的腹水进行纯化,纯化后的单抗效价可以达到1:5.12×10⁵。