人参果胶的制备、结构鉴定及其抗肿瘤活性研究

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人参是我国珍贵的药食两用植物,人参中特含的活性成分人参果胶因其具有良好的生物活性而受到人们的广泛关注。现如今对人参果胶的主要提取方式是沸水浸提或乙醇浸提,而提取过后的人参残渣被丢弃,造成了一定的浪费。因此,本课题以沸水浸提后的人参残渣作为原材料,以弱碱液为溶剂,经过提取、分离、提纯得到一种酸性杂多糖PGP-1,对其进行结构鉴定和体外抗肿瘤活性研究,并分析PGP-1诱导肿瘤细胞凋亡的机制。本文以沸水浸提2 h后的人参残渣作为原材料,以0.01%Na OH溶液作为溶剂,沸水浸提2 h,将得到的溶剂通过冻融浓缩、乙醇沉淀以及透析袋(300 kDa)透析,得到一种人参果胶PGP-1。化学组成、高效液相色谱、傅里叶红外光谱、气相和核磁共振结果表明,PGP-1是一种糖含量为89.55±0.30%、糖醛酸含量为63.47±0.05%、蛋白质含量为6.84±0.07%,且分子量为605 kDa的大分子酸性多糖,其糖苷键组成是由(1→4)-α-D-Glcp(31.3%)、(1→3)-α-D-Galp(9.2%)、(1→4)-α-D-Glcp A(14.1%)、(1→3)-α-D-Galp A(35.8%)、1→α-D-Glcp A(5.8%)、(1→3,6)-α-D-Galp A(1.8%),和1→α-D-Galp(2.1%)组成的。此外,MTT实验结果表明PGP-1对Hep G2和MGC803肿瘤细胞的抑制效果可达到142.59μg/mL和226.67μg/mL,而对正常细胞无明显毒性作用。细胞形态学拍照、Hoechst 33258染色、Annexin V-FITC/PI染色、细胞周期结果显示,PGP-1与MGC803细胞共培养24 h后MGC803细胞出现典型的凋亡特征,并将凋亡阻滞在G1期,凋亡率达到60.03%。活性氧实验结果显示PGP-1能够刺激细胞内活性氧的生成,促使CytC的释放,同时Bcl-2和Bax蛋白家族也能调控细胞色素C的释放,CytC与Caspase-9前体经活化后激活Caspase级联反应,致使细胞损伤,诱导细胞通过线粒体通路凋亡。本文通过对沸水浸提后的人参残渣进行二次利用,然后对提取到的人参果胶PGP-1进行结构鉴定和体外抗肿瘤活性的研究,结果显示PGP-1是通过线粒体通路诱导肿瘤细胞发生凋亡,这些数据可为人参果胶在食品和制药行业的应用提供理论基础。
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