背景和目的炎症性肠病(inflammatory bowel disease, IBD)是一种病因尚不明确的肠道慢性炎症性疾病,包括溃疡性结肠炎(Ulcerative colitis, UC)和克罗恩病(Crohn’s disease, CD)。IBD的发病率近年来一直呈上升趋势,其病程迁延反复,难以彻底治愈,严重影响患者的生活质量甚至威胁患者的生命健康。目前IBD的诊断主要基于临床表现、内镜、组织学、放射学以及基因检测等资料,侵入性及昂贵的检查手段常给患者带来身心负担。近年来,IBD相关的生物标记物检测因无创、操作简单、易被患者接受等特点而受到国内外学者的关注。寻找有效的生物标记物,为IBD的早期诊断、有效治疗及疾病进展评估提供更准确的依据已成为医学领域面临的严峻挑战。在发病机制上目前认为IBD是感染、环境等因素触发了遗传易感个体异常的肠道粘膜免疫反应,导致肠道持续的炎症和组织损伤。研究证实CD4+Thl/Th2/Thl7细胞亚群失衡与IBD的发生密切相关。此外,IBD中存在针对肠道正常菌群及自身抗原失去免疫耐受,产生过强的免疫反应,产生自身抗体,介导组织损伤。异常活化和分化的B细胞在这一过程中可能发挥重要的作用,进而参与IBD的发生发展。B细胞活化因子(B cell activating factor, BAFF)是肿瘤坏死因子超家族(tumor necrosis factor super family, TNFSF)的成员之一,是B细胞分化、发育、成熟和稳定的重要调节因子。BAFF通过与其受体结合,提供B细胞生存信号,促进生发中心形成和抗体类别转换。BAFF的过表达时则可刺激外周B细胞增殖分化,使自身反应性B细胞逃逸凋亡信号,促进浆细胞的存活,导致机体免疫耐受状态的破坏。除了是B细胞的关键调节因子,BAFF在T细胞共刺激方面亦发挥重要作用。研究报道BAFF在多种慢性炎症性疾病中表达异常增多,如系统性红斑狼疮、类风湿性关节炎、干燥综合征等,并且部分患者病情和血清BAFF水平相关。然而BAFF在IBD中的表达情况尚不明确。在本研究中,我们试图分析BAFF及其受体在IBD不同组群中的表达差异及其与临床特征的相关性,探索BAFF作为IBD生物标记物的潜在临床价值,深化我们对BAFF在IBD发病机制中作用和地位的认识,为IBD的临床治疗提供一定的思路和理论依据。方法1.收集明确诊断为UC的患者78例、CD患者37例,肠易激综合征患者12例,健康对照44人,采集外周静脉血、肠道活检标本(IBD患者肠道标本包括炎症部位和非炎症部位)和粪便标本。ELISA法检测血清及粪便BAFF的表达水平。实时定量Western blot和免疫荧光法检测肠道组织BAFF的基因和蛋白表达水平。应用Bio-plex高通量平台测定血清炎症细胞因子的含量。2.建立葡聚糖硫酸钠诱导的实验性结肠炎模型。C57BL/6小鼠16只,随机分为慢性肠炎组(n=8)：小鼠自由饮用3% DSS溶液7天,然后改为饮用正常水10天,此为一个周期,共4个周期；正常对照组(n=8)：自由饮相应天数正常水。每天记录小鼠的体重、粪便、活动和精神状态等一般情况,通过疾病活动评分、结肠组织大体形态、结肠长度及组织病理学评分进行模型评价。3.通过实时定量PCR、Western blot和免疫荧光法检测各组小鼠结肠组织BAFF的基因和蛋白表达水平。实时定量PCR法检测小鼠结肠组织中BAFF三种受体(BCMA、TACI、BAFF-R)的mRNA表达。免疫荧光法检测小鼠肠道组织B细胞数量改变。ELISA法检测各组小鼠血清和肠道粘液中IgA、IgG抗体的含量。结果1.数据以中位数(四分位数间距)表示。CD患者血清BAFF水平为1430(1105-1624)pg/ml, UC组为1472(1018-1772)pg/ml,均较正常对照组(977(482-1345)pg/ml)显著升高(P值分别为0.005和0.007)。活动期患者的血清BAFF水平较非活动期患者和正常对照组升高,差异具有统计学意义(P值分别为0.046和0.001)。2.UC患者血清BAFF水平与Mayo评分存在相关性(r=0.425,P=0.017),且血清BAFF与hsCRP、TNF-α、IL-1β均显著相关(r值分别为0.745、0.810、0.829,P值分别为<0.001、0.015、0.042)。3.受试者工作特征曲线(ROC)分析血清BAFF最佳截断值为1414pg/mL,敏感性和特异性分别为64%和93%,曲线下面积(AUC)为0.797(95%可信区间：0.654-0.940)。4.与健康组比较,BAFF在UC和CD患者结肠组织中表达均增高,差异有统计学意义(实时定量PCR结果：P值分别为0.003和0.045, Westernblot结果：P值分别为0.005和0.028),免疫荧光结果显示BAFF在肠道固有层有表达,且表达明显增加。5.CD患者粪便BAFF水平为369(326-493)pg/ml, UC组为542(358-1758)pg/ml,均较IBS组(294(287-299)pg/ml)和正常对照组(295(284-309)pg/ml)显著增加(P值均<0.001)。活动期UC患者的粪便BAFF水平高于非活动期UC组,两者比较差异有统计学意义(P=0.033)。非活动期IBD患者的粪便BAFF水平显著高于IBS和正常对照(P<0.01)。6.ROC曲线分析粪便BAFF最佳截断值为325 pg/mL,敏感性和特异性分别为90%和96%,AUC为0.936(95%可信区间：0.868-1)。7.成功建立结肠炎模型,与对照组比较,DSS组小鼠结肠中BAFF的表达增加,差异有统计学意义(实时定量PCR结果：P=0.033,Western blot结果：P=0.024)；其受体BCMA mRNA水平较正常对照组增高,差异具有统计学意义(P=0.04),而TACI和BAFF-R的表达无明显改变(P>0.05)。8.DSS模型组结肠B细胞浸润数量明显增加；血清IgA、IgG抗体水平显著升高(P值分别为0.019和0.028)；肠道粘液Igh、IgG水平升高,与对照组比较,差异具有统计学意义(P值分别为0.03和0.012)。结论BAFF在IBD患者血清、结肠组织及粪便中表达增加,可能参与了疾病的发生发展。血清BAFF与UC疾病活动度相关,具有评估患者疾病严重程度的潜能。粪便BAFF是较为理想的IBD生物学标志物,其诊断效能优于血清BAFF。DSS介导的慢性结肠炎模型是研究BAFF作用机制的合适模型。BAFF与UC中异常增多的B细胞及抗体的产生是否有关尚需要进一步的探讨。