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研究背景:多囊卵巢综合征(polycystic ovary syndrome,PCOS)是育龄女性最常见的生殖内分泌紊乱综合征,发病率为5%-10%。PCOS的病因尚不清楚,目前认为主要与遗传及环境相关,以卵巢内持续存在卵泡发育成熟障碍为特征。PCOS具有异质性,其病理改变十分复杂,包括窦状卵泡发育异常、颗粒细胞增生凋亡、卵泡膜细胞过度增生、高雄激素血症及慢性排卵障碍等。卵巢中卵泡的发育过程主要包括有效卵泡的生长,颗粒细胞的增殖分化,卵泡基底层扩张,最后,卵泡液在卵泡窦中的形成。人卵泡液能为卵母细胞生长发育提供重要的微环境,其中包含许多物质,包括蛋白质、代谢产物、离子化合物,与卵子的成熟过程和质量息息相关。最新研究发现人卵泡液中不仅含有上述物质,还含有微小RNA(microRNA,miRNA)。miRNA是一类长约19-26个核苷酸的单链非编码RNA,参与基因的转录及转录后调控,能与靶mRNA的3’UTR区结合,负向调控其表达。miRNA参与各种各样的调节途径,与多种疾病相关,如癌症、代谢性疾病等。除此之外,miRNA还广泛参与女性卵泡发育成熟、受精、着床及早期胚胎发育等过程,对维持女性正常生育功能起着不可替代的作用。目前对PCOS患者卵泡液中的miRNA研究较少,因此,我们旨在探究PCOS患者卵泡液中有哪些miRNA表达存在异常,这些表达异常的miRNA在PCOS疾病的发生发展中起了何种重要作用。目的:1.探索PCOS患者卵泡液中差异表达的miRNAs。2.探讨差异表达的miRNAs在PCOS发病机制中所起的作用,如颗粒细胞功能障碍或卵泡形成异常。方法:首先收集在上海交通大学医学院附属仁济医院生殖中心行IVF/ICSI助孕的PCOS患者和对照组患者的卵泡液,利用miRNA高通量测序找出差异表达的miRNAs,通过定量实时聚合酶链式反应(qRT-PCR)验证测序结果。然后使用生物信息学分析软件,鉴定差异表达的miRNA的生物学功能、相关信号通路及其可能的靶基因。最后,采用Western blot、体外细胞培养和转染、双荧光素酶报告系统和细胞计数试剂盒-8(CCK-8)验证miR-335-5p的靶基因及miR-335-5p对颗粒细胞增殖的影响。结果:两组共有19个miRNAs差异表达,PCOS组中3个miRNAs上调,16个miRNAs下调;qRT-PCR证实PCOS组卵泡液和颗粒细胞中miR-335-5p表达显著降低(P<0.01);卵泡液中miR-335-5p的表达水平与窦卵泡计数、抗苗勒管激素和总睾酮呈显着负相关(ρ=-0.623,P=0.001;ρ=0.570,P=0.01,ρ=-0.708,P=0.001)。血清/糖皮质激素诱导激酶家族成员3(SGK3)是miR-335-5p的靶基因;PCOS组SGK3的mRNA和蛋白水平均显著高于对照组(P<0.05);miR-335-5p mimic可以抑制KGN细胞增殖,并降低Akt和mTOR的磷酸化水平。结论:在PCOS患者中,卵泡液中低表达的miR-335-5p和内分泌异常有关;低表达的miR-335-5p可通过上调SGK3表达使颗粒细胞过度增殖,其作用机制与PI3K-Akt-mTOR信号通路有关,这可能导致PCOS卵泡过度募集及成熟障碍,本研究为改善PCOS颗粒细胞功能障碍提供了新的分子靶点。