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犬肛周腺肿瘤(Hepatoid gland tumours)起源于犬肛周腺组织,其发病率约占犬全部肛门周围肿瘤的80%,高发于未去势老年公犬,在雄性犬的肿瘤中发病率排名第三。国内外关于犬肛周腺肿瘤的研究主要集中在病理形态分析和临床治疗等方面,针对犬肛周腺肿瘤的分子生物学研究少有报道,目前对犬肛周腺肿瘤发生、发展和转移的分子机制尚不清楚。本项研究首次采用高通量测序技术对肛周腺肿瘤与正常肛周腺组织进行了差异表达基因分析,旨在探索该肿瘤发生机理,寻找有望成为临床诊断的特异性分子标记物,从而为该肿瘤的早期临床诊断与治疗提供有益的依据。本次测序的10例犬肛周腺肿瘤样本均来源于老年公犬,平均年龄为12.8岁,其中高分化肛周腺腺瘤4例、中分化肛周腺腺瘤3例、高分化肛周腺腺癌1例、中分化肛周腺腺癌2例。涵盖了除罕见的肛周腺上皮瘤外所有该肿瘤分型。6例正常肛周腺组织也来源于老年公犬,平均年龄为11.6岁。上述样本均经石蜡切片H.E.染色,按照WHO肿瘤分型标准鉴定了组织结构及细胞成分。本文采用IlluminaHiSeq TM 2500高通最转录组RNA-scq测序技术对犬肛周腺肿瘤的组织和对应的正常肛周腺组织分别进行测序,并通过实时定量PCR随机验证了9个候选基因,其表达结果与转录组测序结果一致,证实了测序结果的可靠性。测序结果发现肿瘤组与正常对照组比较差异表达基因588个,其中上调基因23个,下调基因565个,达到统计学上差异极显著水平的基因(FC≥2, FDR<0.05)有94个。发现转录异构体isoforms中差异转录本827个,其中上调24个,下调803个,达到差异极显著水平的(FC≥2, FDR< 0.05)26个。通过对GO富集分析,共有120个基因得到归类注释,其中细胞过程类别(Cellular Component)富集基因数最多为59个、生物过程类别(Biological Process)基因37个、分子功能类别(Molecular Function)24个。KEGG分析发现有470个基因涉及信号通路262个,其中代谢信号通路(Metabolic pathways)涉及基因数最多为16个基因,其次为嗅觉信号通路(Olfactory transduction)涉及12个基因、代谢通路(Metabolism)涉及8个基因,此外癌症信号通路(Pathways in cancers)、信号转导通路(SignalTransduction)、PI3K-Akt各涉及7个基因。经过数据分析发现了一些上下调显著的基因可能与肛周腺肿瘤发生、发展密切相关,如：MMP-1(基质金属蛋白酶-1)、FGF7(成纤维细胞生长因子7)、GST(谷胱甘肽转移酶)、ECM(细胞外基质)等基因。在插入缺失方面,发现肛周腺肿瘤的样本中单核苷酸多样性(SNP)、插入或缺失(Indel)的数值比对照组显著增多,表明肛周腺肿瘤中可能存在大量基因插入或缺失现象,且肛周腺肿瘤中新增的SNP、InDe1基因具有组织特异性。本次研究还针对差异表达显著的上调基因MMP-1和下调基因FGF7进行了免疫组化染色观察,经光密度值(OD)分析,发现MMP-1在正常肛周腺和肛周腺肿瘤细胞胞浆中均有表达,OD差异不显著,不适合作为特异性分子标记物。FGF7在正常肛周腺组织胞浆中强烈表达,而在肿瘤细胞胞浆中表达量显著下降,OD值差异显著,有望作为肛周腺肿瘤的特异性诊断标记物。