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背景目前精神障碍性疾病的发病机制尚不明确,许多学者对病因先后提出过许多神经递质假说。比如多巴胺功能亢进假说、谷氨酸假说等,其中最重要的是5-羟色胺(5-HT)假说。人们从脑脊液、血小板、神经结构及其代谢产物等不同研究方向发现了中枢神经系统中存在5-HT异常的证据。5-HT参与合成色氨酸的重要神经递质,且与很多精神疾病相关症状有直接或间接的联系,而且研究也表明5-羟色胺及其主要代谢物5-羟基吲哚乙酸两者在脑脊液水平,更能反映出大脑中5-羟色胺传输。在神经系统中神经递质5-HT通过其多重受体发挥重要的调节活性,比如情绪、摄食、学习、冲动、记忆、性行为和认知等。5-HT功能紊乱以及5-HT受体功能缺失认为精神障碍性疾病的主要病因。5-HT神经递质受体目前克隆的有十四种且被归为七型,研究显示5-HTR2A在精神障碍性疾病的自杀人群前额叶表达量的研究显示受体数量下调。目前认为,大脑中5-HTR2A功能缺失为精神疾病的病因之一。目的细胞水平研究5-HTR2A-1438A/G(rs6311)的突变对5-HTR2A基因和蛋白转录调控的影响,进一步验证精神障碍的5-HT假说并从分子遗传学角度探讨非典型抗精神病药物个体疗效差异的生物学基础。方法利用分子生物学技术,本研究实验通过提取基因组DNA,使用PCR扩增5-HTR2A,凝胶回收后成功构建5-HTR2A-T载体。利用定点突变引物,使用PCR扩增出5-HTR2A的突变体,并成功构建了-1438A-TK-PGL4.17和-1438G-TK-PGL4.17荧光素酶报告质粒。将构建了-1438A-TK-PGL4.17和-1438G-TK-PGL4.17荧光素酶报告质粒集运测序,以验证插入所有碱基序列的正确性。使用脂质体法分别将上述两种转染HeIa和IMR-32中,转染48小时后收获并裂解细胞,使用双荧光报告基因检测试剂盒,分别检测各组荧光素酶活性。以海肾荧光素酶报告基因荧光值(PIL-TK)作为内参质粒校正各组转染效率,其比值的不同反应各组基因型插入片断的转录活性,同时提取各组细胞蛋白,使用免疫印迹方法检测蛋白变化情况,并比较各组之间的组间差异。结果在Hela细胞系中的研究结果表明,以TK-PGL4.17与-1438A-TK-PGL4.17相比,转录活性的影响无统计学差异(P>0.05),说明-1438A-TK-PGL4.17荧光报告质粒可以成功转染Hela细胞系。而-1438A-TK-PGL4.17与-1438G-TK-PGL4.17相比,转录活性的影响有统计学差异(P<0.05),说明5-HTR2A-1438A/G多态性影响5-HTR2A基因的转录活性。突变型未检测到对转录活性的差异(P>0.05)。在不表达5-HTR2A的IMR-32细胞系中的研究结果表明,以TK-PGL4.17与-1438A-TK-PGL4.17相比,转录活性的影响无统计学差异(P>0.05),说明-1438A-TK-PGL4.17荧光报告质粒可以成功转染IMR-32细胞系。而一1438A-TK-PGL4.17与-1438G-TK-PGL4.17相比,同样转录活性的影响没有统计学差异(P>0.05),说明在不表达5-HTR2A的细胞中,5-HTR2A-1438A/G多态性对5-HTR2A基因的转录活性无影响。免疫印迹结果表明,在Hela细胞系中,转染-1438G-TK-PGL4.17的细胞中5-HTR2A蛋白的表达量远远低于-1438A-TK-PGL4.17组。说明5-HTR2A一1438A/G多态性影响5-HTR2A基因的转录活性。而在不表达5-HTR2A的IMR-32细胞系中,5-HTR2A-1438A/G多态性对5-HTR2A蛋白的转录活性无影响。结论体外证实5-HTR2A-1438A/G(rs6311)基因多态性,可以显著降低5-HTR2A受体基因及蛋白的转录活性。