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喹乙醇(Olaquindox)是化学合成的喹噁啉类广谱抗茵药物,作为饲料添加剂可显著促进动物生长,并可预防和治疗细菌感染性疾病。但研究发现,喹乙醇具有中等以上的蓄积毒性,使用不当会导致动物畸变,癌变甚至死亡,且残留在动物组织中的喹乙醇对人体健康也有很大的威胁。目前,动物组织中喹乙醇残留检测方法主要是色谱法和酶联免疫法(ELISA),但这些方法对操作人员要求较高,耗费时间较长,不易普及。随着胶体金免疫层析技术(gold immune chromatographic assay,GICA)快速诊断试纸条(简称胶体金试纸条)的发展,其因具有检测简便快捷、无需检测仪器,且成本低、无污染等优点,已逐渐被应用于食品农兽药残留的监测中。本试验旨在应用胶体金免疫层析技术建立动物组织中喹乙醇残留的快速定量检测方法。1.喹乙醇多克隆抗体的制备和鉴定。为制备喹乙醇多克隆抗体,采用琥珀酸酐法合成半抗原喹乙醇半琥珀酸酯(OLA-HS),通过活化酯法将半抗原与载体蛋白(BSA和OVA)偶联制备喹乙醇免疫原(OLA-HS-BSA)和包被原(OLA-HS-OVA),利用紫外分光光度法测定其浓度并扫描鉴定；利用制备的免疫原对6周龄BALB/c小鼠免疫以制备多克隆抗体,ELISA法测定多抗血清效价,鉴定抗体敏感性和特异性。结果显示,OLA-HS和BSA,OVA的分子结合比分别为6：1和6：1,血清效价达到1：51200,检测抗体IC50值为17.4 ng/mL,IC20值为3.86 ng/mL,与卡巴氧的交叉率为0.53%,与乙酰甲喹,3-甲慕-喹噁啉-2-羟酸等药物几乎不存在交叉反应。2.喹乙醇胶体金免疫层析试纸条的制备。将已制备纯化好的喹乙醇多克隆抗体与胶体金结合产生的金标抗体喷涂在玻璃纤维垫上,并将包被抗原OLA-OVA和羊抗鼠二抗分别结合在硝酸纤维素膜上,组装成免疫层析快速检测试纸条,并检测试纸条的灵敏度、特异性、准确性和稳定性。将制备的试纸条用于检测猪肉和猪肝样品,结果表明本研究制备的试纸条可以在5 min内完成检测,肉眼观察的最低检测限为0.05μg/mL,与其结构类似物卡巴氧、乙酰甲喹、3-甲基-喹噁啉-2-羟酸的反应交叉性小,该试纸条假阳性率小于5%,假阴性率为0,在干燥常温条件下保存6个月仍然有效。因此,本试验研究的检测方法可应用于动物组织中喹乙醇的快速检测和现场筛查。3.喹乙醇胶体金免疫层析试纸条定量检测喹乙醇的残留量和市场应用。在胶体金免疫层析基础上建立了T/C比值法定量检测动物组织中喹乙醇残留,检测结果与ELISA和高效液相色谱法(HPLC)目比较。当组织中喹乙醇质量浓度在1～200 ng/mL范围内,试纸条有较好的线性关系,最低检测限为6.83 ng/mL。阴性加标试验结果表明,喹乙醇浓度在25,50和100 ng/mL时,试纸条的回收率在90.9～105.0%之间,与采用用ELISA法和HPLC法的检测结果较一致。总之,本研究所研制的喹乙醇胶体金试纸条具有特异性强、稳定性好、灵敏度高等特点,在实际动物组织样品的喹乙醇残留检测中所得到的检测结果与ELISA法和HPLC法的检测结果较一致,可用于动物组织中喹乙醇残留的快速定量检测。