目的:类风湿性关节炎是一种常见的系统性自身免疫性疾病,而骨关节炎是一种常见的显著损害关节功能的关节退行性疾病,二者都属于目前主要的老年病之一。盐酸青藤碱是治疗类风湿性关节炎和骨关节炎的理想药物。然而口服和注射等全身给药方式会导致血浆中出现高浓度的盐酸青藤碱,从而产生强烈的释放组胺效应,引起皮疹和胃肠道等副作用的发生。以局部给药为主的经皮给药方式可以提高关节液中的盐酸青藤碱浓度而不会出现高血浆浓度,从而能使疗效增强并降低系统副作用的发生。但是由于表皮的屏障作用,盐酸青藤碱被动扩散的透皮效率较低。所以我们运用了电致孔来促进盐酸青藤碱经皮给药。同时筛选出最优的电致孔参数来促进盐酸青藤碱经皮渗透,尝试考察电致孔促透的机理,在临床上验证最优参数的电致孔促盐酸青藤碱经皮渗透的效果及该疗法的疗效。为指导电致孔促盐酸青藤碱经皮给药制剂的开发与设计,临床前研究以及更安全有效地应用盐酸青藤碱治疗类风湿性关节炎和骨关节炎等疾病提供基本的理论基础。方法:1.分别应用小鼠皮肤(最常用的实验动物之一)和小型猪皮肤(与人体皮肤最接近的实验动物之一)进行体外经皮给药实验,用透皮扩散仪小池收集不同时间点的体外透皮样品,考察应用不同电致孔参数时盐酸青藤碱的累积透皮通量和透皮吸收促进效率的情况,从而筛选出最优电致孔参数。2.使用小鼠皮肤和小型猪皮肤进行体外经皮给药实验,考察应用不同的给药浓度时盐酸青藤碱的累积透皮通量和透皮吸收促进效率的情况,从而考察给药浓度与电致孔促进盐酸青藤碱经皮渗透的关系。3.使用免疫组化中HE染色和荧光剂替代法对电致孔促进盐酸青藤碱经皮渗透的机理进行研究,通过观察施加与未施加电致孔刺激后的小鼠和小型猪皮肤结构的变化,和观察荧光剂的荧光在小鼠皮肤和小型猪皮肤上的分布,来研究应用电致孔后皮肤结构发生的变化,研究电致孔促进药物渗透进入皮肤的方式,进而解开其促透的机理。4.根据如下纳入标准,筛选在广州中西医结合医院针灸康复科的类风湿性关节炎和骨关节炎等关节性疾病的患者21名:有膝关节炎症,有膝关节疼痛的症状或与膝关节炎类疾病相关的任何其它症状;Kellgren-Lawrence放射学等级评级为Ⅰ-Ⅲ的患者等。把最优参数电致孔促进盐酸青藤碱经皮给药疗法应用于临床中,考察施加与未施加电致孔促透后病例关节液中盐酸青藤碱的浓度对比,考察施加与未施加最优参数电致孔促进盐酸青藤碱经皮给药疗法后实验组和阳性对照组的临床症状改善率对比,从而对最优参数电致孔促进盐酸青藤碱经皮给药疗法的临床疗效进行确证。结果:1.在离体小鼠皮经皮给药实验中,通过电致孔促透后盐酸青藤碱的累积透皮通量比未施加电致孔促透的被动扩散增加1.9-10.1倍,而在离体小型猪皮实验中增加1.6-47.1倍。并且离体小型猪皮实验中出现了和离体小鼠皮实验相似的实验结果,当电致孔参数分别选择3 KHz、指数波、强度10时,累积透皮通量与透皮促进效率均大于选择其他电致孔参数的。累积透皮通量随着给药浓度(0.38-3.04mmol/L)的增加而逐渐增加。2.未施加电致孔的小鼠和小型猪皮肤结构紧密,且表皮的细胞紧密排列,表皮细胞的边缘难以区分。但是被施加电致孔刺激后的皮肤组织发生了变化,皮肤结构松散,细胞间隙增加,表皮裂缝分布增多。在未施加电致孔的小鼠和小型猪皮肤上的荧光素钠的黄绿色荧光仅分布在角质层的最外侧,皮肤内部几乎观察不到荧光。当对小鼠和小型猪皮肤施加电致孔时,我们能明显观察到角质层,颗粒层甚至有棘层上都能观察到非常明显的黄绿色荧光。3.在临床测试中,实验组的关节活动度的改善率为94.75±6.84%,关节疼痛度的改善率(VAS)为79.39±4.63%。与实验组相比,阳性对照组(未配合使用电致孔促盐酸青藤碱经皮给药)的上述两个参数较低,关节活动度的改善率为52.41 士12.51%和关节疼痛度的改善率(VAS)为62.40±7.54%。此外,相对于阳性对照组,实验组的关节活动度的改善率具有统计学差异(P<0.05)。经过电致孔促盐酸青藤碱溶液透皮给药治疗后在病例关节液样品盐酸青藤碱的最大和最小浓度分别为20.84 ng/mL和0.39 ng/mL。而非电致孔对照组的浓度低于定量下限。结论:1.我们的研究结果表明最优参数的电致孔能显着增强盐酸青藤碱的经皮渗透。并确证了电致孔参数和给药浓度均是影响电致孔促盐酸青藤碱经皮渗透的关键因素之一。在本研究中,促进盐酸青藤碱经皮渗透的适合人体的最优脉冲频率为3 KHz,最优脉冲波形为指数波,最优脉冲强度为强度10。2.电致孔促进盐酸青藤碱经皮渗透的机理是通过电子脉冲刺激皮肤细胞间隙和表皮裂痕增加,从而改变表皮的结构,增加皮肤渗透性,并最终促进盐酸青藤碱的经皮渗透。3.优化参数的电致孔促盐酸青藤碱经皮给药疗法确实能提高患者临床症状改善率,并显著增加了盐酸青藤碱在病例关节液中的浓度。因此凭借其能提高疗效和降低副作用的优点,本论文研究的最优参数的电致孔促盐酸青藤碱透皮给药治疗法可以被作为一种理想的治疗类风湿性关节炎和骨关节炎等关节性疾病的治疗方案。