【摘 要】
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云斑白条天牛（Batocera lineolata Chevrolat）是一种多寄主的重大林业蛀干害虫,目前罕见有针对其病原菌研究的相关研究报道。为筛选出可用于云斑白条天牛生物防治的病原菌,本研究从广西河池市核桃种植基地采集自然罹病死亡云斑白条天牛幼虫虫体,利用传统微生物鉴定与分子生物学鉴定相结合的方法,对体内细菌和真菌进行了分离和鉴定;利用回接感染试验筛选出了云斑白条天牛的病原菌,选择毒力最强的
【基金项目】
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广西自然科学基金面上项目“云斑天牛对寄主核桃和桉树的选择适应机制”【No.2017GXNSFAA 198142】
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云斑白条天牛（Batocera lineolata Chevrolat）是一种多寄主的重大林业蛀干害虫,目前罕见有针对其病原菌研究的相关研究报道。为筛选出可用于云斑白条天牛生物防治的病原菌,本研究从广西河池市核桃种植基地采集自然罹病死亡云斑白条天牛幼虫虫体,利用传统微生物鉴定与分子生物学鉴定相结合的方法,对体内细菌和真菌进行了分离和鉴定;利用回接感染试验筛选出了云斑白条天牛的病原菌,选择毒力最强的菌株进行室内杀虫毒力测试,并对该菌的发酵培养条件进行了优化。通过测定病原菌处理对云斑白条天牛幼虫中肠及血淋巴中蛋白质和主要酶系的影响,揭示病原菌致病的生理机制。结果如下:（1）从自然罹病死亡的云斑白条天牛幼虫体内分离获得的21株细菌分别属于沙雷氏菌属（Serratia）、克雷伯氏菌属（Klebsiella）和产碱杆菌属（Alcaligenes）等12属;获得的8株真菌分别属于虫草属（Cordyceps）、螺旋聚孢霉属（Clonostachys）、镰刀菌属（Fusariums）等6个属。（2）回接感染验证实验发现菌株B5、F1、F2和F3均为云斑白条天牛幼虫的病原菌,其中菌株B5的杀虫活性最为显著,它的种属地位为肠杆菌科（Enterobacteriaceae）沙雷氏菌属（Serratia）粘质沙雷氏菌（S.marcescens）。通过室内杀虫毒力测试,发现毒力效果与菌浓度有关,表现为浓度越高,杀虫活性越强,累计校正死亡率越大,致死中时越短。菌悬液浓度为4.8×1011cfu/m L时,15 d的累计校正死亡率达100%,致死中时LT50为4.77 d。（3）菌株B5最优的培养基成分及发酵条件:蔗糖为碳源,添加量为1%;酵母粉为氮源,添加量为6%;Na Cl添加量为1%;温度为32℃,初始p H=7,摇床转速为240 rmp。（4）云斑白条天牛幼虫被菌株B5感染后,体内中肠和血淋巴中蛋白质含量、保护酶和解毒酶活力均发生了显著变化。中肠和血淋巴中蛋白质含量均呈先升后降的趋势。在中肠的保护酶系中,POD和SOD均呈先上升后下降再上升的趋势,而CAT的活力呈先增后减的趋势;在血淋巴的保护酶系中,POD和SOD的活力呈先增后减的趋势,而CAT的活力呈“M”形变化趋势;在中肠的解毒酶系中,Car E和GSTs的活力呈“M”形变化趋势,而Ach E的活力呈先上升后下降再上升的趋势;在血淋巴的解毒酶系中,GSTs的活力呈“M”形变化趋势,Ach E的活力呈先增后减的趋势,而Car E的活力一直低于对照组呈先减后增的趋势。其中,SOD、GSTs和Ach E在血淋巴中的活力远大于中肠,而Car E在中肠的活力大于血淋巴。以上结果表明,菌株B5（粘质沙雷氏菌）具有较强的杀虫活性,它导致云斑白条天牛幼虫代谢失调,蛋白质含量和解毒抗性能力明显下降。因而,菌株B5在云斑白条天牛生物防治中具有应用潜力。
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