四种灵芝科真菌和硬柄小皮伞的化学成分及生物活性研究

来源 :南京农业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:handan0918
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本论文对灵芝科Ganodermataceae假芝属Amauroderma厦门假芝(Amauroderma amoiensis)、鸡冠孢芝属Haddowia长柄鸡冠孢芝(Haddowia longipes)以及灵芝属Ganoderma黄边灵芝(Ganoderma luteomarginatum)和热带灵芝(Ganoderma tropicum)四种野生药用灵芝及硬柄小皮伞进行了化学成分的分离鉴定及生物活性评价。运用减压柱层析、反相柱层析、硅胶柱层析、葡聚糖凝胶柱层析等色谱分离技术,并结合一维、二维核磁共振技术以及红外、紫外、质谱等现代波谱技术,从上述材料中共分离鉴定了单体化合物121个,其中新化合物26个,结构类型涉及三萜、甾体、倍半萜、生物碱等,并对这些天然产物进行了抗肿瘤和神经保护等生物活性的研究。本文主要研究结果如下:1.通过各种色谱技术,从厦门假芝子实体乙醇提取物中分离得到25个单体化合物,其中,有两个新化合物分别为:聚合物amauroamoienin和倍半萜化合物amoienacid。采用MTT法对部分化合物进行了体外抗肿瘤活性测定,发现4-hydroxy-17-methylincisterol、ergosterol peroxide、(22E,24R)-ergosta-8,22E,-diene-3β,5α,6β,7α-tetraol、22E-7α-methoxy-5α,6α-epoxyergosta-8(14),22-dien-3β-ol、1,5-dihydroxy-6’,6’-dimethylpyrano[2’,3’:3,2]xanthone和jacareubin对肿瘤细胞表现出抑制活性。采用2种体外抑制酶乙酰胆碱酯酶(AChE)和丁酰胆碱醋酶(BuChE)对部分单体化合物胆碱酶抑制活性筛选结果表明,(17R)-17-methylincisterol和jacareubin具有两种胆碱酯酶双重抑制活性。2.从长柄鸡冠孢芝子实体乙醇提取物中分离得到29个单体化合物,其中,有11个新化合物分别鉴定为:11-oxo-ganoderiol D,lanosta-8-en-7,11-dioxo-3β-acetyloxy-24,25,26-trihydroxy,lanosta-8-en-7-oxo-3β-acetyloxy-11β,24,25,26-tetrahydroxy,lanosta-7,9(11)-dien-3β-acetyloxy-24,25,26-trihydroxy,lanosta-7,9(11)-dien-3β-acetyloxy-24,26-dihydroxy-25-methoxy,11-oxo-lucidadiol,11β-hydroxy-lucidadiol,lucidone H,lanosta-7,9(11),24E-trien-3β-acetyloxy-26,27-dihydroxy,(22E,24R)-6-methoxyergosta-7,9(11),22-triene-3β,5α-diol,methyl sinensine E。对部分化合物进行了体外抗肿瘤活性测定,发现化合物lanosta-8-en-7-oxo-3β-acetyloxy-11β,24,25,26-tetrahydroxy、lanosta-7,9(11)-dien-3β-acetyloxy-24,25,26-trihydroxy、lanosta-7,9(11)-dien-3β-acetyloxy-24,26-dihydroxy-25-methoxy和11-oxo-lucidadiol对肿瘤细胞表现出抑制活性。AChE抑制活性筛选结果表明,11-oxo-ganoderiol D、lanosta-8-en-7,11-dioxo-3β-acetyloxy-24,25,26-trihydroxy、lanosta-8-en-7-oxo-3β-acetyloxy-11β,24,25,26-tetrahydroxy、lanosta-7,9(11)-dien-3β-acetyloxy-24,25,26-trihydroxy、11β-hydroxy-lucidadiol、lucidone H、ganoderiol D、lanosta-8-en-7-one-3β-acetyloxy-24,25,26-trihydroxy、ganodermanondiol、lucidumol B、lucidadiol、lucidadone A、lanosta-7,9(11),24E-trien-26-al-3-oxo具有抑制活性,且含有共轭体系O=C7-C8=C9-0=C11的三萜比含有两个双键的共轭体系C7=C8-C9=C11的三萜抑制活性更强。对2个灵芝生物碱类化合物sinensine D和methyl sinensine E抗炎抗敏相关活性初步筛选测试结果表明,两者对肥大细胞脱颗粒的抑制率分别达到55.06%和51.80%。3.从黄边灵芝子实体乙醇提取物中分离得到38个单体化合物,其中,有8个新的灵芝三辟化合物,分别为:lanosta-7,9(11)-dien-3β-acetyloxy-24,25-dihydroxy,lanosta-7,9(11)-dien-24,26-dihydroxy-25-methoxy,lanosta-7,9(11)-dien-3β,24,26-trihydroxy-25-methoxy,lanosta-8,24E-dien-7-oxo-3β-acetyloxy-26-hydroxy,lanosta-8,24E-dien-7-oxo-3β-acetyloxy-26-al,lanosta-7,9(11),24-trien-3β-acetyloxy-26-hydroxy,methyl Ganoderate A1,methyl Ganoderate A2。对部分化合物进行了体外抗肿瘤活性测定,发现化合物lanosta-7,9(11)-dien-3β-acetyloxy-24,25-dihydroxy、lanosta-7,9(11)-dien-24,26-dihydroxy-25-methoxy、lanosta-7,9(11)-dien-3β,24,26-trihydroxy-25-methoxy、ganoderiol A、ganoderiol F、lucidumol A、5α-lanosta-7,9(11),24-triene-3β-hydroxy-26-al和calvasterol B对肿瘤细胞表现出抑制活性,且多数有抗肿瘤活性的化合物具有两个双键的共轭体系C7=C8-C9=C11的骨架特征。对部分单体化合物AChE抑制活性筛选结果表明,化合物lanosta-7,9(11),24-trien-3β-acetyloxy-26-hydroxy、methyl ganoderate A2、ganodermadiol、26-hydroxy-ganodermanondiol具有弱的抑制活性。4.从热带灵芝子实体乙醇提取物中的正丁醇部分分离出3个新的灵芝三萜成分,分别鉴定为ganotropic acid,3β,7β15α,24-tetra-hydroxy-11,23-dioxo-lanost-8-en-26-oic acid和3β,7β,15α,28-tetra-hydroxy-11,23-dioxo-lanost-8,16-dien-26-oic acid,其中ganotropic acid的侧链上形成了独特的两个含氧五元环。对3个新化合物进行了体外抗肿瘤活性、抗金黄色葡萄球菌以及AChE抑制活性测定,发现三者均无上述生物活5.通过对四种灵芝科真菌的化学成分比较发现,厦门假芝中不含灵芝三萜类成分,这可能是假芝属区分于灵芝属的重要化学特性。黄边灵芝和长柄鸡冠孢芝的化学成分高度相似,推断长柄鸡冠孢芝和黄边灵芝具有较近的亲緣性,或是由亲缘更近的共同祖先类群进化而来,对两者的ITS4&5序列分析发现,前者GC含量为48.4%,序列长度为692 bp,后者GC含量为45.9%,序列长度为634 bp。长柄鸡冠孢芝中含有灵芝三萜类成分,但未发现灵芝酸成分,这可能是区分鸡冠孢芝属与灵芝属的特征成分。6.从硬柄小皮伞子实体乙醇提取物中分离得到26个单体化合物,其中,有两个新化合物分别为:新类型的留体化合物oreadesol和麦角甾醇类新化合物8α,9α-epoxyergosta-6,22-diene-3β,5α,14α-triol。部分单体化合物的AChE抑制活性筛选结果表明,化合物8α,9α-epoxyergosta-6,22-diene-3β,5α,14α-triol和(22E,24R)-ergosta-7,22-diene-3β,5α,6β,9α-tetraol对AChE具有一定的抑制活性。
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