两种甘薯病毒外壳蛋白基因表达载体的构建及农杆菌介导甘薯遗传转化

来源 :广东海洋大学 | 被引量 : 1次 | 上传用户:mulu911
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甘薯(Ipomoea batatas(L)Lam.)是我国重要的粮食与经济作物,主要用于食品、蔬菜、饲料及工业等行业。中国是世界上最大的甘薯生产国,种植面积约达550万公顷,产量约为1.06亿吨左右。病毒病是导致甘薯产量降低和种性退化的主要原因之一,目前对甘薯病毒病尚无有效的防治方法。由于缺乏抗原材料、育种周期长及甘薯杂交不亲和性等原因,使杂交育种培育抗病毒品种比较困难,所以应用转基因技术来培育抗病毒甘薯品种显得尤为重要。已报导侵染甘薯的病毒约有20种,甘薯羽状斑驳病毒(SPFMV)和甘薯G病毒(SPVG)是其中两种重要的病毒。本研究主要得到如下结果:1、植物表达载体pCAMBIA1301VGCP的构建根据SPVG-HN(GenBank登录号为DQ399861)CP基因cDNA序列设计引物SPVG-F/R,通过RT-PCR得到目的基因并测序。测序结果表明扩增的片段与报道的序列同源性为98.2%。同时双酶切质粒pMDVGCP与pCAMBIA1301并将它们连接,成功构建出植物表达载体pCAMBIA1301VGCP。2、植物表达载体pCAMBIA1301VGCP对甘薯的转化以甘薯品种“台农71”与“紫罗兰”的茎段为受体,通过农杆菌介导的转化方法,得到32株转基因植株,其中“台农71”有13株,“紫罗兰”有19株。3、植物表达载体pCAMBIA1301-SL的构建根据SPFMV(GenBank登录号为D86371)CP基因cDNA序列设计2对引物,通过RT-PCR扩增出目的基因并测序。测序结果表明扩增的片段与报道的序列同源性为96.8%。通过酶切与连接构建出中间载体pMD18-SL,同时双酶切质粒pMD18-SL与pCAMBIA1301并将它们连接,成功构建出植物表达载体pCAMBIA1301-SL。4、植物表达载体pCAMBIA1301-SL对甘薯的转化以甘薯品种“台农71”、“紫罗兰”和“广菜薯1号”的茎段为转化受体,通过农杆菌介导的转化方法,得到36株转基因植株,其中“台农71”有8株,“紫罗兰”有16株,“广菜薯1号”有12株。
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