论文部分内容阅读
背景人端粒酶逆转录酶(human telomerase reverse transcriptase,hTERT)是端粒酶活化过程中的限速酶,而端粒酶的活性与大多数恶性肿瘤的发生有关,这其中也包括肾癌。相关文献证明在多种恶性肿瘤中hTERT基因启动子区的高甲基化与端粒酶的表达有密切关系。肾癌的发生也与hTERT基因启动子区异常甲基化有关。肾癌是成人中常见的恶性肿瘤,其发病率呈逐年上升趋势。早期局限于肾包膜的肾癌手术治疗预后较好,但肾癌缺乏明确的肿瘤特异性标志物来早期诊断,因此研究新型无创性诊断方法从而及早进行诊疗具有较高的临床意义。许多肿瘤相关基因在肾癌患者组织细胞以及尿沉渣中的甲基化已被证实有意义,这对于肾癌的诊断与发生机制有重要意义。目的研究肾癌组织和尿沉渣中hTERT启动子区甲基化位点,寻找对于肾癌诊断有意义的高甲基化位点,并探究检测肾癌患者尿沉渣中hTERT启动子区甲基化对于肾癌诊断的可行性。方法查找文献寻找肿瘤相关hTERT启动子区高甲基化可疑位点,已知文献甲基化引物两组(M-250、U-250及M-600、U-600)以及应用甲基化引物设计软件设计甲基化引物1组(M-300、U-300)。收集76位肾癌患者(肾癌组)手术前晨尿标本及其中28例肾癌肿瘤组织、28例肾癌癌旁正常组织,38例非肾癌患者(对照组)术前晨尿标本。应用甲基化特异性PCR (methylation specific PCR, MSP)检测尿沉渣中hTERT基因甲基化状态,分析证明对于肾癌诊断有意义的hTERT启动子区高甲基化位点及其甲基化结果与临床指标相关性；应用焦磷酸测序法检测肾癌组织与肾癌癌旁正常组织中hTERT基因启动子区的甲基化状态,寻找有意义的甲基化位点。结果1.hTERT启动子区引物M-250、U-250及M-600、U-600在肾癌组与对照组尿沉渣中甲基化率无统计学差异。引物M-300、U-300在肾癌组与对照组的尿沉渣中甲基化率有统计学差异。2.通过肾癌组尿沉渣的甲基化状态与临床资料分析,得出性别、年龄、肿瘤TNM分期以及肿瘤的大小与hTERT基因甲基化无统计学意义,即上述各因素与hTERT基因高甲基化无关。3.焦磷酸测序定量的证明肾癌组织中hTERT甲基化率高于癌旁正常组织,甲基化特异性PCR定性的证明肾癌组尿沉渣中hTERT高甲基化率高于对照组尿沉渣,差异有统计学意义。结论1.明确了hTERT启动子区高甲基化在肾癌患者的术前尿沉渣及肾癌组织中存在,其甲基化状态与年龄、性别、肿瘤TNM分期以及肿瘤的大小无关；2.证明尿沉渣中hTERT甲基化检测作为一种无创性检测方法有助于肾癌临床标志物的研究。