iaaM基因转化‘美人指’葡萄的研究

来源 :南京农业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:nickymin
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本研究以‘美人指’葡萄(Vitis vinifera L’Manicure Finger’)为材料,在已建立的‘美人指’葡萄不定芽再生体系的基础上,采用农杆菌介导法以及花粉管通道法,将iaaM基因导入‘美人指’葡萄中,以期获得定向改良目的性状的‘美人指’葡萄新种质。本实验系统探讨了影响‘美人指’葡萄遗传转化效率的因子,优化了农杆菌介导法的主要技术参数,研究结果如下:1.以‘美人指’葡萄茎段、叶柄、叶片为农杆菌介导转化iaaM基因的受体,对影响遗传转化的一系列因子:农杆菌浸染时间、共培养时间、卡那霉素选择压、头孢霉素浓度等进行了研究。结果表明:农杆菌侵染4min,共培养3d,卡那霉素选择压3mg/L,头孢霉素浓度250mg/L为最佳的农杆菌介导‘美人指’葡萄的遗传转化体系。2.通过超声波辅助农杆菌介导法,对‘美人指’葡萄遗传转化体系进行研究,以期提高转化效率。利用GUS瞬时表达的方法研究了不同处理功率、时间、外植体类型及AS浓度对‘美人指’葡萄遗传转化效率的影响。结果表明,外植体茎段在含75mg/LAS农杆菌悬浮液中侵染4min,并在此期间,用功率为90w的超声波处理14s,获得最佳GUS瞬时表达率42.8%。3.采用优化的农杆菌介导转化体系,对‘美人指’葡萄进行转化,共获得7株抗性苗。利用GUS组织化学染色、PCR扩增及RT-PCR检测,结果表明,2株抗性植株GUS染色和PCR检测呈阳性,其中1株通过RT-PCR检测,初步证实iaaM基因已经整合到‘美人指’葡萄基因组中,并得到了表达。4.以‘美人指’葡萄花序为转化iaaM基因的受体,利用花粉管通道法对‘美人指’葡萄进行转化,胚培养共获得了19株单株。利用GUS组织化学染色、PCR扩增的方法进行检测,结果表明,3株GUS染色呈阳性,GUS阳性率为15.8%,同时3株GUS阳性植株均通过了PCR检测,初步证实iaaM基因已经整合到‘美人指’葡萄基因组中。
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