目的：建立简便、高效、低成本制备小片段发夹RNA(small halrpin RNA shRNA)的方法，为广泛开展RNA干扰实验创造条件。探讨针对人端粒酶的shRNA对Hela细胞端粒酶基因表达的干扰作刚，为shRNA对端粒酶基因表达的沉寂作用提供实验依据。 方法：根据端粒酶hTERT基因1573—1591位的核酸序列，构建带T7启动子的部分双链DNA模板，用T7RNA聚合酶体外合成短链shRNA。以磷酸钙共沉淀转染法将shRNA转染Hela细胞。于不同的时间用台盼蓝染色法检测细胞生存能力。用TRAP-银染法和PCR-EIA分别检测经转染不同shRNA量和作用时间Hela细胞端粒酶活性。 结果：本法制备的shRNA的纯度为(OD260／280 1.961)产量为(7.88μg／20μL反应体系)。用该法制备的shRNA转染Hela细胞后端粒酶活性降低。 结论：以带T7启动子部分双链DNA为模板，用T7RNA聚合酶体外合成出的shRNA产量较高，纯度较好，是一种简便、高效、低成本的短链RNA的制备方法，适合于普通实验室用来进行短链RNA的合成和RNA干扰实验。以端粒酶TERT基因1573—1591位的核酸序列构建的shRNA可对Hela细胞端粒酶基因表达产生一定的沉寂作用。