东方梨生理活性成分的HPLC分析研究

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中国不仅是东方梨的发源中心,同时也是世界第一产梨大国,在漫长的栽培和食用过程中,古人已经发现了梨的许多食疗和保健作用,然而到目前为止,关于梨果实中生理活性成分方面有价值的研究报道十分罕见。在前期研究中,本研究组曾首次发现东方梨果实中有高含量的熊果苷、绿原酸等酚类活性物质,本实验研究表明熊果苷和绿原酸应该是梨果实最具代表性的活性成分。 本文利用国产高效液相色谱仪建立了测定梨果实中主要活性成分的等度高效液相色谱法和梯度淋洗高效液相色谱法,等度淋洗高效液相色谱分析方法使用HYPERSIL C18 BDS色谱柱(4.6mm×200mm,5μm),流动相为甲醇:水(25∶75,v/v),磷酸调节pH值为3.20,流速0.6 ml/min,室温条件,紫外检测器波长280nm,分析时间13分。熊果苷在144-5000ng,绿原酸在200-5000ng的范围线性相关系数均为0.99998,最低检出限分别为0.153ng和0.150ng,加标回收率分别为101%和97%。对梨果实中熊果苷、绿原酸、儿茶素、表儿茶素、咖啡酸、香豆酸、槲皮素等多酚类活性成分建立了双泵高压梯度淋洗的高效液相色谱分析方法。梯度淋洗程序(min/B%)为:0/2,3/2,4/25,11/50,16/80,26/80,33/2,45/2,流动相用磷酸调pH3.20,280nm检测波长下,30分钟内样品组分全部沈出,45分钟时色谱柱重新稳定,可以分析下一个样品。采用建立的高效液相色谱法对鸭梨的花期和果实生长期活性成分含量进行了动态分析,花期的不同器官中两种成分含量均处于较高的水平,尤其熊果苷,在花芽和叶芽中含量高达1.3%左右,绿原酸为3000μg/g左右。在果实生长期,幼果中两种酚类成分含量最高,分别为1.0%和0.38%,之后快速下降,果实成熟时这些酚类成分含量降低到400μg/g以下。对东方梨系统的白梨、砂梨、秋子梨和新疆梨以及西洋梨5个种的22个品种进行了分析,东方梨果实中熊果苷的含量(17个品种平均164μg/g)高于西洋梨(5个品种平均83μg/g),其中主栽品种白梨中的鸭梨含量最高,达到400μg/g。西洋梨中的绿原酸含量更为突出,平均309μg/g,高于东方梨的含量(平均158μg/g)。这些成分在果实中的分布差别很大,熊果苷在果皮中含量最高,分别为果心和果肉的3-5倍和10-40倍。东方梨中绿原酸的分布果心含量高于果皮,而西洋梨则相反。
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