夹竹桃粗提物提取工艺及其抑菌活性的研究

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夹竹桃中含有大量的强心苷和生物碱类等多种活性成分,本实验开展了夹竹桃粗提物提取工艺的研究、夹竹桃粗提物抑菌效应研究、夹竹桃纯水粗提物对水稻纹枯病致病菌立枯丝核菌细胞膜透性和物质代谢的影响3个部分的研究,为进一步开发夹竹桃源生物农药提供依据。(1)以夹竹桃树皮、叶和花的鲜样和干样为材料,采用溶剂法提取夹竹桃粗提物。在单因素实验的基础上,选取提取时间(X1)、液料比(X2)和提取温度(X3)3个因素采用三元二次通用旋转组合设计来优化来夹竹桃叶纯水粗提物提取工艺条件。结果表明3个因素对夹竹桃活性粗提物质量得率均有显著影响,且影响夹竹桃粗提物质量得率的因素主次顺序为提取时间(X1)>液料比(X2)>提取温度(X3)。优化后得到夹竹桃粗提物最优提取工艺条件为提取时间90 min、液料比12:1、温度49℃。此条件下的夹竹桃粗提物质量得率实测值为(9.75±0.31)%与理论值9.87%十分相近。(2)以白花型夹竹桃树皮、叶、花的鲜样和干样为实验材料,分别用纯水、纯乙醇、50%乙醇、乙酸乙酯、石油醚、丙酮对其进行浸提,制备获得夹竹桃不同部位的纯水粗提物、夹竹桃鲜叶不同溶剂的粗提物和不同浓度的夹竹桃鲜叶纯水粗提物,采用生长速率法分别测定其对3种植物病原真菌(立枯丝核菌、辣椒盘长孢菌和刺盘孢菌)的抑菌活性。结果表明,夹竹桃树皮、叶、花的鲜样和干样纯水粗提物对3种供试植物病原真菌均表现出较好的抑制效应,其中鲜样的纯水粗提物的抑菌效应要好于干样的抑菌效应;夹竹桃鲜叶不同溶剂的粗提物对3种病原真菌均有较好的抑制作用,其中纯水粗提物抑菌效应最好,50%乙醇粗提物次之,其它粗提物抑菌活性较差。夹竹桃鲜叶的纯水粗提物对刺盘孢菌的抑制作用最好,其次为辣椒盘长孢菌,对立枯丝核菌的抑制效应显著低于前两种菌。(3)以水稻纹枯病菌为供试菌,利用生物化学手段,开展夹竹桃纯水粗提物对水稻纹枯病菌细胞膜透性、还原糖、脂肪、蛋白质含量以及过氧化物酶体活性的影响。结果表明:夹竹桃纯水粗提物能够增加立枯丝核菌细胞膜透性,使小分子糖类外泄,但对蛋白质大分子物质的选择性透过功能无影响,同时夹竹桃粗提物能抑制过氧化物酶体的活性并对菌丝造成直接伤害,促使菌丝断裂。
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