【摘 要】
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很多机制参与了脊椎动物的性别发育这个复杂的过程。然而,参与性别决定和分化的基因目前很多都未知。黄鳝是具有天然的性反转的淡水鱼类,在它的一生中会经历先雌后雄的性别发育过程,其分子机理目前仍不清楚。我们从它的性腺中,克隆到人破骨细胞刺激因子Ostf(osteoclast-stimulating factor)的同源基因。聚类分析表明该基因和其它物种Ostf基因有很强的同源性。它编码一个含214个氨基酸
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很多机制参与了脊椎动物的性别发育这个复杂的过程。然而,参与性别决定和分化的基因目前很多都未知。黄鳝是具有天然的性反转的淡水鱼类,在它的一生中会经历先雌后雄的性别发育过程,其分子机理目前仍不清楚。我们从它的性腺中,克隆到人破骨细胞刺激因子Ostf(osteoclast-stimulating factor)的同源基因。聚类分析表明该基因和其它物种Ostf基因有很强的同源性。它编码一个含214个氨基酸的多肽,其中含有SH3 domain(c-Src homology 3 domain),ankyrin repeats和N端的脯氨酸富集区,这提示它可能参与了细胞内的信号传导。随后我们研究了它的表达特征,尽管该基因是广谱表达的,但是它在黄鳝性腺中的表达却只局限于生殖上皮。黄鳝的生殖上皮中含有双向分化潜能的生殖细胞,暗示着该基因可能参与了黄鳝的性反转。 β-actin是actin家族的一员,β-actin在维持细胞结构,细胞内运动,细胞分裂等细胞生理活动方面发挥着重要的作用。我们克隆了黄鳝的β-actin基因。它的cDNA全长1860bp,编码375个氨基酸,在脊椎动物中不同物种的β-actin基因之间的序列同源性超过了98%。基于目前已知的全部鱼类的β-actin cds和3’UTR,我们分别构建了进化树。结果它们都一致支持将鱼类的β-actin基因划分为四类。黄鳝的β-actin基因属于其中的第二类。同时RT-PCR表明我们克隆的黄鳝的β-actin基因在睾丸、卵巢、心、肝、脾、脑等组织中广谱表达。 BAC(细菌人工染色体)文库在分析复杂的基因组结构、功能方面有着非常重要的作用。黄鳝基因组很小,只有600Mb,我们设法构建它的基因组BAC文库。基因组DNA用BamHI部分消化,然后通过脉冲场电泳两次选择回收,电洗脱,最后克隆到pBeloBAC11的衍生型载体plndigoBAC-5中。初步结果,得到了3000个克隆,平均插入片段110kb,空斑率12%。尽管最终高覆盖率的文库没有最终完成,但是这为以后构建基因组覆盖的BAC文库提供了相应的技术基础。
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