随着农药混剂的普遍使用以及人们对食品安全的重视,现阶段生鲜果蔬中单元农药残留超标现象已有一定的减少,然而同一样品中同时检测到多种低残留农药的情况却显著增加,随之产生的联合毒性效应的不确定性对人体健康产生严重威胁。因此,探究联合毒性效应,并建立一种快速、便捷、高效检测农药联合毒性的方法势在必行。在本论文中,我们首先依据酶抑制法原理,利用荧光探针N-乙基-1,8-萘二甲酰亚胺（NEN）及酶标仪探究了果蔬中常用混合农药对人类细胞色素P4503A4酶（CYP3A4）的联合毒性,并进一步分析了农药与CYP3A4之间的构效关系;其次,在上一研究内容的基础上,我们建立了一种利用农药残留荧光快速检测仪快速高效、广谱筛查混合农药联合毒性效应的方法,并依据此方法探究了混合农药在三种浓度梯度下对羧酸酯酶（CES）的联合毒性及农药与CES之间的构效关系。主要研究内容如下:（1）三种浓度梯度下对CYP3A4的联合毒性均具有协同作用的有克百威+多菌灵、克百威+吡虫啉等4种二元组合和氯氰菊酯+啶虫脒+烯酰吗啉、克百威+啶虫脒+多菌灵等6种三元组合;对CES的联合毒性均具有协同作用的有毒死蜱+多菌灵、克百威+多菌灵等6种二元组合和吡虫啉+啶虫脒+多菌灵1种三元组合。（2）利用CES、探针4-乙酰氧基-N-正丁基-1,8-萘酰亚胺（ACE-NH）、农药残留荧光快速检测仪测定农药毒性的测试条件为:孵育体系总体积500μL、配制好的相应浓度的农药或DMSO 10μL、PBS 470μL、HLM1000X 10μL、探针10μL、乙腈150μL、预孵温度37℃、预孵时间10 min以及反应时间20 min。（3）当单一农药对CYP3A4酶活性的抑制率较高时,与其他农药混合后联合毒性效应呈拮抗作用,而当单一农药对酶活性的抑制率低于2%时,与其他农药混合后联合毒性效应呈现不确定性。农药组合在低浓度下对CYP3A4的联合毒性往往存在较强的协同作用,但随着浓度的增加,联合效应从协同向拮抗转变。（4）含有芳氯基团的数量与对CYP3A4酶活性的抑制程度成正相关,含有三个芳氯及以上基团的农药对CYP3A4酶活性的抑制作用最为显著,抑制率在30%以上;含有两个芳氯或“强吸电子基团+一个芳氯”基团的农药对CYP3A4酶活性的抑制作用较强,抑制率在18%以上。具有氨基甲酸酯基团的农药单独作用于CYP3A4酶毒性较小或几乎没有毒性时,与其他农药混合后显示较强的协同作用。（5）含磷酸酯键的农药对CES有很大的毒性,或者虽然单独对CES没有毒性,但与其他农药混合使用时毒性增强。含酰胺或酯键的农药毒性中等,协同作用较小。含脲基、氨基甲酸酯或亚硝酸盐氮基团的农药毒性较小或无毒性,而与其他农药混合使用时存在较强的协同作用。本研究建立的检测方法为广谱筛查混合农药联合毒性提供了新的思路,检测结果可为进一步在细胞和动物水平的农药混剂的风险评估方案设计提供依据。