恶性肿瘤是目前人类死亡的主要原因之一。人类对肿瘤的早期诊断和有效治疗缺乏特异性是恶性肿瘤对人类生存产生巨大威胁的主要原因。目前所发现并用于早期临床诊断的肿瘤标志物与正常细胞相比还没有质的区别,只是量的不同,缺乏真正的特异性;手术切除、放疗和化疗的联合应用是目前临床上治疗肿瘤的主要手段,虽然手术切除是去除实体瘤组织的有效方法,但在切除肿瘤组织的同时把一部分正常组织也扩大切除了,对人体创伤大,并且还有复发和转移的危险,术后仍需放疗和化疗,但是,不论是放射性同位素还是化疗药物对于肿瘤细胞和正常细胞都不加区分的一起杀死,因此在治疗肿瘤的同时也对人体造成了极大的损害,并且由于不能使用较大剂量而严重影响放疗和化疗的效果。当前恶性肿瘤早期诊断和有效治疗方面存在的诸多不利因素的一个根本原因是人们对正常细胞和恶性肿瘤细胞之间差异的理解缺乏足够的知识。 SELEX(Systematic evolution of ligands by exponential enrichment)技术是20世纪90年代发展起来的一种生物文库技术,该技术的目的就是利用人工合成的随机寡核苷酸文库筛选某一靶分子的特异寡核苷酸配基。由于SELEX技术具有可筛选的靶分子范围非常广,理论上能筛选已知的所有分子;筛选得到的配基亲合力和特异性极强,远高于其他任何类型的配基;操作简便,筛选周期短等优点,SELEX技术在临床诊断和疾病治疗方面具有广阔的应用前景。 本研究将消减杂交的原理引入SELEX筛选,分别以分化前后PC12细胞为消减靶子和筛选靶子,建立消减SELEX技术,并筛选获得特异识别已分化PC12细胞而不识别未分化PC12细胞的单链DNA(single stranded DNA,ssDNA)配基。期望能够为临床肿瘤诊断和治疗提供新的、实用的技术方法。 为了建立以完整细胞为靶子的消减SELEX技术,我们首先建立以单一蛋白为靶子,用随机ssDNA文库进行SELEX筛选的方法,为建立以完整细胞为靶子的消减SELEX技术提供技术准备。研究结果表明:同样大小的ssDNA和双链DNA(double-stranded DNA,dsDNA)在7M尿素12%变性聚丙烯酰胺凝胶电泳