产核黄素基因工程菌B.subtilis RH44代谢物组学的初步研究

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本文对枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis RH44的代谢物组学进行了初步的研究。通过质谱信号对比,确定了热乙醇的提取方法;通过分离条件的对比,确定了LC/MS的检测条件,流动相组成为A:1mM甲酸铵,B:80%甲醇含1mM甲酸铵,洗脱梯度为0~10min A:98 %- 40%,10~20 min A:40 %- 24%。采用最佳检测条件,分离检测胞内代谢物,分别用STD和MS/MS两种方法,确定了16种胞内代谢物。对不同培养基、不同培养时间、不同菌种的胞内代谢物进行了对比研究。不同培养基的对比中,优化氮源的还原力水平高于(NH4)2SO4氮源,有利于核黄素的合成;培养12h时,菌体和核黄素合成速率较快,胞内物质消耗快,积累现象不明显,24h时,菌体进入平稳期,核黄素合成也相应变慢,胞内物质含量升高;原始菌株B. subtilis 168的代谢网络中,几乎不含有核黄素合成所需的前体物,B. subtilis RH44中,核黄素合成前体物含量较明显。
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