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骨形态发生蛋白(BMPs)是TGF-β超家族的重要成员之一,BMPs对雌性繁殖性能有重要作用,特别是对卵巢的作用尤为显著,能够调控颗粒细胞增殖和细胞分化,也对卵母细胞发育有作用。故对BMPs及其受体结构的分子克隆及在不同组织表达的分析,来确定BMPs及其受体在牛不同组织所起的作用,进而对从基因角度研究不孕或多胎的机制具有重要的现实意义。
本试验应用RT-PCR方法从蒙古牛卵巢组织中扩增获得BMP-15、GDF-9、BMPR-IB和BMP-4的部分基因序列;并通过半定量RT-PCR分析了BMP-15、GDF-9、BMPR-IB和BMP-4基因mRNA在蒙古牛不同组织中的表达情况。方法:(1)在Genbank中查找人、小鼠和羊的BMP-15、GDF-9、BMPR-IB和BMP-4基因序列设计引物;提取牛卵巢总RNA,分别采用RT-PCR技术扩增牛BMP-15、GDF-9、BMPR-IB和BMP-4的部分序列,将此片段重组到PMD18-T载体中,双酶切和PCR鉴定后测序。结果证实,所克隆的序列分别为牛BMP-15、GDF-9、BMPR-IB和BMP-4部分eDNA序列。(2)以β-actin为内参照物,应用RT-PCR方法检测BMPs在牛不同组织中可能的表达。结果显示,BMP-15、GDF-9、BMPR-IB和BMP-4基因mRNA均在卵巢、输卵管、子宫和肾脏组织中表达。凝胶电泳条带灰度分析的结果显示:牛BMP-15基因在卵巢和输卵管中高度表达;牛GDF-9基因在卵巢中高度表达,而在输卵管、子宫和肾脏中表达水平较低;牛BMPR-IB基因在卵巢和子宫中表达水平较高,在输卵管和肾脏中的表达水平低;牛BMP-4基因在卵巢中高度表达,在子宫中的表达量也相对较高,而在输卵管和肾脏中表达量不是很高。