炭疽芽胞杆菌(Bacillus anthracis)是可形成芽胞的革兰式阳性需氧菌，可导致炭疽疾病。炭疽是草食动物的一种主要疾病，人类接触土壤中、皮毛上的炭疽杆菌芽胞可以导致感染。芽胞可以通过呼吸道、消化道和皮肤接触感染人类，以皮肤型炭疽最常见。由于炭疽芽胞在环境中的抵抗力极强，有可能为生物恐怖分子所利用而造成社会动荡。2001年美国出现的炭疽杆菌芽胞生物恐怖事件也说明了该菌芽胞的威胁性。无论是生物战的使用，还是作为生物恐怖手段，快速检验和鉴定炭疽芽胞杆菌是最关键的。最近发展迅速的生物高新技术——基因芯片技术为炭疽芽胞杆菌的鉴别诊断提供了一种快速、高效、敏感、经济、自动化的方法。 本研究以炭疽芽胞杆菌的毒素质粒pX01和荚膜质粒pX02为原材料，根据GenBank中两个质粒的特异性基因序列信息，设计引物并扩增了质粒pX01上的特异性基因pagA、lef、cya和pX02上的特异性基因CapB。分别以炭疽芽胞杆菌的毒素质粒pX01和荚膜质粒pX02以及其上的特异性基因为原材料，使用限制性内切酶Sau3AI酶切质粒pX01和pX02及特异性基因，酶切片段经Taq DNA聚合酶72℃补平加A，并与T载体连接，后转化感受态细胞。一次PCR初步鉴定并筛选出炭疽芽胞杆菌DNA片段的阳性克隆。采用牙签插胶的方法回收一次PCR产物并以此为模板进行二次PCR扩增，以减少探针所包括冗余的T载体序列，制备纯净的炭疽芽胞杆菌基因芯片探针。实验中共收集了294个阳性克隆探针，并打印在经过氨基化修饰的玻片上，制成炭疽芽胞杆菌DNA芯片。 此外，根据炭疽芽胞杆菌毒素质粒pX01和荚膜质粒pX02的基因序列信息，并按照寡核苷酸探针设计原则设计了检测炭疽芽胞杆菌的60mer寡核苷酸特异性探针，并使用DMSO作为点样液，将20条60mer特异性寡核苷酸探针打印在经过多聚赖氨酸包被的DAKO硅烷化玻片上，制成检测炭疽芽胞杆菌的寡核苷酸基因芯片。 分别提取苏云金(Bacillus thuringiensis)、蜡样(BacillusCereUS)、枯草(Bacillus subtilis)芽胞杆菌及正常人血液总DNA，以限制性显示技术标记细菌、正常人血液总DNA及炭疽芽胞杆菌的两个质粒DNA并与炭疽芽胞杆菌DNA芯片进行了杂交反应，扫描并分析各探针的荧光强度。实验中对所制备的DNA芯片检测炭疽芽胞杆菌的实验条件做进一步优化。实验结果显示:基因芯片技术可以有效地检验出炭疽质粒的DNA序列成分。采用限制性显示标记技术进行样品的标记，可提高芯片杂交信号;在荧光标记后的样品内加入EDTA，也是一种提高芯片信噪比的方法;此外，在高严谨性的条件下(高温，低盐离子浓度、短时间)杂交可提高芯片检测的特异性。