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根据本实验室构建的鸭瘟病毒(DPV) CHv株基因文库及其测定的序列信息,设计了UL41基因引物,PCR扩增出鸭瘟病毒CHv株UL41基因(GenBank登录号EU071040),对UL41基因的分子特征和稀有密码子使用情况等做了一系列生物信息学分析,对UL41基因进行原核表达、蛋白纯化和抗体制备、转录时相分析以及UL41蛋白的亚细胞定位研究,获得如下结果：1.鸭瘟病毒UL41基因序列的分子特性分析DPV UL41基因大小为1497bp,编码498个氨基酸(aa)。根据信号肽、跨膜区及磷酸化位点预测揭示UL41基因编码的蛋白既没有信号肽也没有跨膜区,片段有24个潜在磷酸化位点。通过对该基因编码蛋白的二级结构预测分析发现无规则卷曲和α螺旋比例较大,三级结构预测发现与Flap endonuclease-1 (FEN-1)有同源性。此外,进化树分析发现该基因属于马立克疱疹病毒属,与MeHV-1、GaHV-2和GaHV-3进化关系最近。2.UL41基因的克隆、原核表达、蛋白纯化及抗体制备设计一对引物,PCR扩增了一条长度为1526bp的DNA片段,此片段囊括了完整的UL41基因开放阅读框(ORF),将此片段插入pMD19-T载体,构建重组质粒pMD19-T-UL41。通过EcoR I和Xho I双酶切pMD19-T-UL41重组质粒回收目的片段,再将该目的片段定向插入pET-32a (+)原核表达载体,构建重组质粒pET-32a(+)-UL41。菌液PCR、EcoR Ⅰ口Xho I双酶切及测序鉴定重组表达质粒pET-32a(+)-UL41正确与否。将鉴定正确的重组表达质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞诱导表达。重组表达菌在IPTG的诱导下成功表达得到与预期大小相同的76kDa 6×His重组融合蛋白,此蛋白主要以包涵体形式存在。UL41蛋白最优表达条件为30℃C摇菌培养加入0.2mmol/L IPTG诱导10h。重组UL41蛋白的Western-blot检测说明其能被兔抗DPV阳性血清识别。重组UL41蛋白纯化后用于制备兔抗UL41多克隆抗体,琼脂糖扩散实验效价为1：8。该多克隆抗体Western-blot检测表明能特异识别表达的UL41重组蛋白。3. DPV UL41基因转录时相DPV感染宿主鸭胚成纤维细胞后,利用荧光定量PCR相对定量法检测UL41基因转录的情况,试验中利用SYBR Green Ⅰ作为荧光染料检测不同时间段收取的细胞样品。结果显示UL41基因6h开始出现转录,36h达到最高峰,54h仍有转录。4. DPV UL41蛋白亚细胞定位间接免疫荧光法检测UL41基因编码蛋白的亚细胞定位情况,结果UL41基因的编码蛋白定位于细胞质中。UL41蛋白表达时相动态结果是DPV感染后6h即能在细胞观察到荧光,随着时间的延长荧光也增强,48h仍能检测到荧光。