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目的观察螺内酯(Spironolactone,SPI)对醛固酮(Aldosterone,ALD)诱导的大鼠肾小球系膜细胞(Mesangial cells,MCs)氧化应激和转化生长因子β-1(Transforming growth factor-β1,TGF-β1)表达的影响,探讨ALD致糖尿病肾病(Diabetic nephropathy, DN)及SPI肾保护作用的可能机制。方法体外培养大鼠MCs,随机分组如下:①NC组:正常对照组(低糖DMEM培养液,葡萄糖浓度为5.6 mmol/L);②ALD组:醛固酮刺激组, ALD 1组:低糖DMEM培养液中加入醛固酮(10-5 mol/L)刺激; ALD 2组:低糖DMEM培养液中加入醛固酮(10-7 mol/L)刺激; ALD 3组:低糖DMEM培养液中加入醛固酮(10-9 mol/L)刺激。③SPI组:螺内酯干预组, SPI 1组:醛固酮(10-7 mol/L)刺激的同时加入螺内酯(10-7 mol/L)干预; SPI 2组:醛固酮(10-7 mol/L)刺激的同时加入螺内酯(10-8 mol/L)干预; SPI 3组:醛固酮(10-7 mol/L)刺激的同时加入螺内酯(10-9 mol/L)干预。48小时后分别收集细胞及上清液。应用流式细胞术检测细胞内活性氧(Reactive oxygen species,ROS)水平; RT-PCR(Reverse transcription polymerase chain reaction,RT-RCR)方法检测细胞TGFβ-1、醛固酮合成酶(CYP11B2)、醛固酮受体( Mineralocorticoid receptor , MR )和11β-羟类固醇脱氢酶2(11β-hydroxysteroid dehydrogenase 2,11β-HSD2)mRNA表达;ELISA(Enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)法检测细胞培养上清液中TGF-β1蛋白浓度。结果1 RT-PCR法检测结果显示MCs表达CYP11B2、MR和11β-HSD2 mRNA;2 ALD对肾小球MCs内ROS产生的影响ALD刺激MCs48h后,细胞内ROS水平显著增加,ALD 1,2,3组分别为(21.77±0.87)、(17.33±0.49)、(15.25±0.63),组间差异显著,P<0.01;与NC组(4.28±0.50)相比,差异显著(P均<0.01)。3 ALD对肾小球MCs TGFβ-1 mRNA表达及蛋白分泌的影响半定量RT-PCR检测发现,NC组系膜细胞可低水平表达TGFβ-1 mRNA(1.22±0.14)及蛋白(0.78±0.12 ng/ml)。ALD作用48 h后,TGFβ-1 mRNA表达及蛋白分泌显著增加,两指标在不同浓度ALD组之间分别比较,组间差异显著(P均<0.05)。4螺内酯对醛固酮诱导的肾小球MCs内ROS产生的影响醛固酮(10-7 mol/L)刺激的同时加入螺内酯干预后,SPI 1,2,3组细胞内ROS水平显著降低,分别为(7.34±0.89)、(9.25±0.65)、(10.9±0.97),组间差异显著,P<0.01;与ALD 2组(17.33±0.49)相比,差异显著(P均<0.05)。SPI 1组ROS水平稍高于NC组,差异无显著性(P>0.05)。5 SPI对ALD诱导的肾小球MCs TGFβ-1 mRNA表达及蛋白分泌的影响醛固酮(10-7 mol/L)刺激的同时加入螺内酯干预后,SPI 1,2,3组MCs TGFβ-1 mRNA表达及蛋白分泌均较ALD2组显著下降(P <0.01或0.05),两指标分别进行组间比较,差异具有显著性(P均<0.0 5)。6肾小球MCs ROS产生和TGFβ-1 mRNA表达及蛋白分泌的相关性分析MCs产生的ROS和TGFβ-1 mRNA表达及蛋白分泌分别呈正相关(r=0.866,P<0.01;r=0.823,P<0.01)。结论系膜细胞表达CYP11B2、MR和保护其配体特异性的11β-HSD2mRNA;醛固酮可与系膜细胞的MR特异性结合,促进细胞内ROS生成增多、TGF-β1mRNA和蛋白表达增多,参与肾脏损伤;螺内酯与醛固酮竞争性结合MR,拮抗醛固酮介导的肾小球系膜细胞内ROS生成及TGF-β1 mRNA及蛋白的表达,其可能是螺内酯参与DN时肾脏保护作用机制之一。