对牛结核分枝杆菌的细胞外分泌蛋白的序列进行了抗原表位分析,结果显示Cfp10和Esat6具有较为广泛的抗原表位,对Cfp10和Esat6进行了克隆和核苷酸序列分析。利用原核表达质粒pMAL-p2X对Cfp10-Esat6基因进行了融合表达。SDS-PAGE电泳检测结果表明,重组菌株分别表达出了65 kDa左右的目的蛋白MBP-EC,目的蛋白为可溶性蛋白表达,分别约占上清可溶蛋白的30.3%。Western Blotting检测证实该重组蛋白可被豚鼠抗牛结核分枝杆菌多抗所识别。表达的蛋白用Amylose树脂层析柱纯化。以纯化的融合蛋白MBP-EC为抗原的酶联免疫吸附试验(ELISA)方法,检测实验感染结核豚鼠血清和健康豚鼠血清中的抗体。建立豚鼠分枝杆菌致敏模型,PPD及重组蛋白皮肤变态反应实验,注射后24h、48h、72h测量DTH反应强度,从而评价了其在结核病血清学诊断和皮试诊断中的应用价值。该重组蛋白具有较高的抗原特异性和免疫反应性,有可能成为结核病免疫学诊断的特异抗原。此研究为牛结核病新型诊断方法的开发奠定了基础。