运用RT-PCR方法对结直肠癌及肝转移相关基因进一步的验证研究

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目的:运用Real time-PCR方法开展对以往全基因芯片筛查所得的结直肠癌和结直肠癌肝转移相关基因进一步的验证研究。方法:选取复旦大学附属中山医院结直肠癌专业组2004年3月~2007年10月手术的结直肠正常组织及结直肠癌组织冻存标本共80例,分为结直肠正常组织组(n=20),结直肠癌无肝转移组(无肝转移组,n=20),结直肠癌同时性肝转移组(同时性肝转移组,n=20)与结直肠癌异时性肝转移组(异时性肝转移组,n=20)。采用基于SYBR green的荧光染料掺入法real-time PCR检测所有标本中84个基因(源自以往全基因芯片筛查所得的结直肠癌和结直肠癌肝转移相关基因)的相对表达量,比较无肝转移组与同时性肝转移组、无肝转移组与异时性肝转移组、同时性肝转移组与异时性肝转移组基因表达差异。另外,分别比较结直肠正常组织组与无肝转移组、同时性肝转移组及异时性肝转移组之间的基因表达差异。运用t检验方法对各组△CT值行组内比较,2-△△CT法分析基因相对表达量。结果:在结直肠癌肝转移相关基因研究中共得到4个差异基因,其中表达上调基因3个,下调基因1个。同时性肝转移组较无肝转移组SRC基因的表达升高2.2倍(p=0.016);同时性肝转移组AZGP1基因的表达较无肝转移组升高2.36倍(p=0.025);同时性肝转移组IQCA基因较无肝转移组上调3.50倍(p=0.015);HCA112基因在异时性肝转移组较无肝转移组下调0.61倍(p=0.040)。在所有结直肠癌组织与结直肠正常组织基因表达差异研究中,共获得24个差异基因,其中下调基因20个,分别为EGFL6、HRASLS、HFE、DTX1、SLC16A7、MAF、ST70T1、PLCL2、ISL1、SLC30A7、MAGED4、CAMK2N1,TDGF1、IL28RA、CYP51A1、SCIN、CDKL1、AQP11、GPR160、CUGBP1;上调基因4个,分别为PLEKHH1、SATB2、AP1G2、MFSD2。结论1 SRC,AZGP1,IQCA基因在结直肠癌组织中的上调表达可能与同时性肝转移相关;2 HCA112基因在结直肠癌组织中的下调表达可能与异时性肝转移相关;3 EGFL6、HRASLS、HFE、DTX1、SLC16A7、MAF、ST70T1、PLCL2、ISL1、SLC30A7、MAGED4、CAMK2N1、TDGF1、IL28RA、CYP51A1、SCIN、CDKL1、AQP11、GPR160、CUGBP1基因的下调表达可能与结直肠癌的发生有关;4 PLEKHH1、SATB2、AP1G2、MFSD2基因的上调表达可能与结直肠癌的发生有关;5上述基因的功能,与结直肠癌及结直肠癌肝转移的关系需要进一步的验证研究。
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