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在母猪繁育过程中,健康的生理状态是保障养猪行业经济效应的关键之一。中性粒细胞胞外诱捕网(Neutrophil extracellular traps,NETs)作为先天免疫系统中重要的一环,是由中性粒细胞释放到细胞外的三维立体网状结构,能够对病原进行捕获和消灭。适量释放的NETs有助于免疫系统消除病原,对机体是有利的。然而,过度释放或未及时降解的NETs会造成组织损伤和引起自身免疫性疾病。雌二醇(Estradiol,E2)和孕酮(Progesterone,P4)是调节母猪发情、妊娠过程中重要的信号分子,大量的研究报道也证实E2和P4对免疫系统也存在明显的调节作用,然而E2、P4对猪中性粒细胞释放NETs的影响尚未见报道。因此,本研究选取不同浓度的E2(5、10、20、40 ng/mL)和P4(5、10、20、40、80ng/mL)探究其对NETs形成的影响及其潜在分子作用机制。在E2与中性粒细胞共孵育2 h后,通过激光共聚焦显微镜和pico-Green定量试剂盒检测NETs形成情况。结果显示,E2(10、20、40 ng/mL)能显著诱导NETs形成。在使用特异性功能抑制剂和western boltting检测后发现,E2诱导NETs形成依赖于雌激素受体α(Estrogen receptorα,ERα)、蛋白精氨酸脱亚氨酶4(Peptidylarginine deiminase,PAD4)、ERK1/2(Extracellular regulated protein kinases)等信号通路。以上结果表明E2(10、20、40 ng/mL)能诱导NETs形成,并且依赖于ERα、PAD4和ERK1/2等信号通路。在P4和中性粒细胞共孵育2 h后,在激光共聚焦显微镜下能明显观察到P4(40 ng/mL)诱导呈网状结构的NETs形成。Pico-Green的定量实验结果发现,与空白组相比,P4(20、40、80 ng/mL)能显著诱导NETs释放。通过特异性功能抑制剂的使用,Cl-amidine和UO126能明显抑制P4诱导的NETs。以上结果表明P4(20、40、80 ng/mL)能显著诱导NETs释放,并且依赖于PAD4和ERK1/2等信号通路。此外,在联合使用E2和P4处理猪中性粒细胞2 h后。Pico-Green定量检测结果显示,P4对E2诱导NETs释放水平有减弱作用,但与单独接受E2处理组相比没有显著性差异。以上结果表明,E2和P4之间存在相互作用、相互调节,共同参与调节NETs释放过程。综上所述,本论文证实E2(10、20、40 ng/mL)、P4(20、40、80 ng/mL)均能诱导NETs形成,两者对NETs释放具有调节作用,并且E2、P4诱导NETs释放过程与PAD4、ERK1/2等信号通路有关。以上结果有利于进一步去阐明妊娠期间雌性生殖激素与免疫系统相互作用的关系,为了临床繁育母猪健康提供保障。