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目的:研究肿瘤坏死因子受体相关因子6(TRAF6)通过与环GMP-AMP(cGAMP)合成酶(cGAS)相互作用调控抗DNA病毒先天免疫反应。进一步探究其具体的调控机制,从而为DNA病毒感染引发的疾病提供新的治疗靶点,有利于推动基础向临床转化的现代化研究。方法:(1)通过质粒共转染实验,利用免疫共沉淀的方法,并使用Western Blot实验技术进行结果分析,研究TRAF6与cGAS之间的相互作用。(2)通过质粒共转染实验,再通过报告基因实验,检测下游Ⅰ型干扰素报告基因的激活,探究TRAF6在cGAS-STING信号通路中的功能。(3)利用变性免疫沉淀实验技术,检测TRAF6对cGAS的泛素化修饰的影响。(4)使用Western Blot实验技术检测cGAS-STING信号通路中相关蛋白磷酸化水平的变化。(5)通过基因干扰技术敲低细胞中TRAF6基因表达,并使用qPCR技术检测HSV-1病毒感染以及双链DNA模拟物刺激后,Ⅰ型干扰素的产生及其他炎性因子的水平和HSV-1病毒的感染情况。结果:在我们的研究中,我们发现TRAF6能够与cGAS特异性结合,并以活性依赖的方式促进cGAS的多聚泛素化,从而激活cGAS-STING信号通路,使磷酸化的TANK结合激酶1(TBK1)和干扰素调节转录因子3(IRF3)水平增高,增强了 IFNβ的产生以及抗DNA病毒先天免疫反应。TRAF6的敲低或活性的抑制会显著降低IFNβ的产生,抑制抗DNA病毒先天免疫反应。结论:在已有的报道中,TRAF6通过自身泛素化调控NF-kB信号通路的激活从而调控先天免疫反应。在这里,我们发现了 TRAF6新的调控抗DNA病毒先天免疫的机制。目前cGAS的研究是免疫学研究的热点,cGAS在先天免疫和肿瘤免疫中的作用已被广泛认知。TRAF6是我们发现的cGAS全新的调控者,因此,TRAF6很有可能参与肿瘤免疫的过程。我们的研究为天然免疫和肿瘤免疫药物设计提供了理论依据。图[5]表[0]参[68]