5-羟色胺1A、2A受体基因在经前期综合症猕猴模型下丘脑中的表达研究

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经前期综合症是指妇女在经前期表现出的一系列生理和情感方面的不适症状,主要表现为烦躁易怒、失眠、紧张、压抑以及头痛、乳房肿胀等,严重者可影响妇女的正常生活。育龄妇女PMS发病率虽由于采用不同诊断标准和方法而异,但普遍认为75-95%孕龄妇女有轻微症状,20%-40%左右达到诊断标准,2-15%可诊断为重症患者,其造成的社会负担相当于抑郁症。该病的发病率较高,至今对于其发病的具体机理尚不清楚。 本实验室构建了PMS疾病猕猴与正常猕猴大脑边缘系统的差减cDNA文库,筛选出与PMS疾病相关的基因,尤其是与PMS有关的一些神经递质、性激素受体的特异性表达的基因,包括γ-氨基丁酸受体基因、5羟色胺1A、2A受体基因等。Blast同源性分析发现猕猴与人5-HT1A、5-HT2A受体基因的有很高的同源性。但是,在差减cDNA文库中并未筛选出文献中报道的与PMS相关的其他一些关键受体基因。以PMS猕猴模型为研究对象,取其大脑边缘系统组织,提取总RNA并纯化。按照已报道的PGR、ER-α、ER-β基因设计引物,运用RT-PCR技术,扩增上述关键受体基因。本试验采用地高辛探针标记从差减cDNA文库中筛选得到的5-HT1A、5-HT2A受体基因片段,通过组织切片原位杂交分析5-HT1A、5-HT2A受体在PMS猕猴模型和正常猕猴下丘脑中的表达情况,并且使用simplePCI软件分析对其定量分析,结果显示,5-HT1A、5-HT2A受体基因在PMS模型猕猴下丘脑中转录水平的表达上升。同时,采用半定量点杂交的方法分析5-HT1A、5-HT2A受体在PMS猕猴模型和正常猕猴下丘脑中的表达情况,两者结果一致,即5-HT1A、5-HT2A受体基因在PMS模型猕猴下丘脑中转录水平的表达上升。 为了进一步确认从猕猴差减cDNA文库中筛选到的PMS相关基因,我们以大鼠作为材料,建立疾病模型,分别取PMS造模大鼠和正常大鼠大脑边缘系统作为实验组和对照组,将实验组定义为Tester,对照组定义为Driver,构建正向差减cDNA文库;将对照组定义为Tester,实验组定义为Driver,构建反向差减cDNA文库。提取总RNA,反转录分别得到PMS造模大鼠与正常大鼠cDNA后,
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