蜂产品中生物碱的分布与变化规律研究

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技术性贸易壁垒已成为世界各国出口贸易发展的主要障碍。近些年来,随着世界范围内蜂产品中生物碱检出事件的频频曝光,蜂产品中新兴的质量安全风险因子—生物碱成为了新的研究热点。但我国还尚未对国内蜂产品市场(包括国内生产的蜂产品以及进口蜂产品)进行生物碱的风险评估以及监督预警。因此,国内消费者可能面临生物碱潜在的健康威胁,蜂产品的出口贸易也存在潜在的贸易壁垒制约。本研究的目的是建立蜂产品中(蜂蜜和蜂花粉)生物碱(吡咯里西啶生物碱和异喹啉类生物碱)的快速、可靠的分析方法,并对我国含有吡咯里西啶生物碱和异喹啉类生物碱的蜜源植物分布规律进行初步探索,之后对吡咯里西啶生物碱和异喹啉类生物碱在蜂蜜采收后存放、加工和贮藏过程中的变化规律进行研究。以此来为国内蜂产品市场中的生物碱的监测预警提供理论依据,规范蜂产品市场,满足人们食用优质和安全的蜂产品需求,并有利于积极应对和破除发达国家设置的技术壁垒。本研究主要分为三个部分,第一部分分别建立了测定蜂蜜和蜂花粉中的吡咯里西啶生物碱和异喹啉类生物碱的分散固相萃取-高效液相色谱-串联质谱法(QuEChERS-HPLC-MS/MS)。测定吡咯里西啶生物碱时,样品经Zn粉还原,乙腈提取,乙二胺-N-丙基硅烷(PSA)吸附剂净化,HPLC-MS/MS测定;测定异喹啉生物碱时无需还原步骤,提取液直接进行分散固相萃取,净化,上机测定。结果表明:在0.1-100μg/L范围内,10种生物碱的相关系数(R2)均大于0.99;在1-100μg/kg的添加水平下,所有生物碱的基质回收率均在70%-110%之间;10种生物碱日内精密度小于15%,日间精密度小于20%;方法检出限和定量限分别为0.3μg/kg和1.0μg/kg。本方法定性定量快速准确,稳定可靠,可用于蜂产品中吡咯里西啶生物碱和异喹啉类生物碱的定性定量分析。第二部分对国内主要市售品种的蜂蜜和蜂花粉以及国外主要市售蜂蜜品种进行吡咯里西啶生物碱和异喹啉类生物碱的分析测定。结果显示:国内的蜂蜜和蜂花粉中的两类生物碱检出率和检出含量较低,而进口蜂蜜的检出率和含量明显高于国内蜂蜜,并且主要是石松胺和蓝蓟定生物碱检出,检出率为分别54%,40%,且最高检出含量分别为177.0μg/kg和177.6μg/kg;进口蜂蜜同一样品中会有多种吡咯里西啶生物碱的存在,最多达4种;计算各生物碱的总和可知,进口蜂蜜样品中的吡咯里西啶生物碱最高含量达226.1μg/kg;从蜜种来看,麦卢卡蜂蜜和杂花蜜检出率较高;从产地来看,新西兰的吡咯里西啶生物碱含量较高。实验证明了国内蜂蜜和蜂花粉检出风险较小,消费者食用也更为健康和安全。而进口蜂蜜检出风险较大,有必要对其进行监督和预警。第三部分对蜂蜜采收后露天存放、加工和贮藏等3个环节的温度和时间两个因素进行吡咯里西啶生物碱和异喹啉类生物碱的变化规律研究。研究结果表明,两类生物碱在40℃露天存放12周内浓度基本没变化,在50℃加工12小时内含量也无明显降低,在25℃贮藏6个月内含量仍无明显降低,说明吡咯里西啶生物碱和异喹啉类生物碱在上述3个环节中非常稳定,很难降解。因此,对于检出风险高的蜂蜜还需监管部门的大力筛查和监督预警,从而保证消费者在食用蜂蜜时的健康和安全。
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