目的： 目前研究认为血管生成是实体肿瘤生长的基本过程，在人类许多类型的肿瘤包括乳腺癌，肿瘤微血管密度（microvesseldensity，MVD）显示出是一独立的预后因素。血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）是一强烈的促内皮细胞分裂原，其表达量的增加与不良的预后相一致。本研究利用免疫组化及分子生物学方法对乳腺癌患者中VEGF的表达进行检测，与临床病理特征、MVD及骨髓微小转移（bone marrowmicrometastases）结果进行比较，观察VEGF的表达在乳腺癌疾病中的意义。并制备抗VEGF及受体KDR单克隆，对种植于裸鼠上人乳腺癌MCF-7肿瘤生长抑制的作用。材料和方法：1、对1998年4月至1999年11月30例乳腺癌患者石蜡块采用 SABC法对VEGF表达进行检测，同时对患者的骨髓通过以 EMA和KT单抗进行检测其骨髓微小转移，对VEGF表达与 病理特征、MVD以及骨髓微小转移进行比较；MVD通过内 皮细胞Ⅷ因子相关抗原免疫组化染色进行测定。2、通过RT-PCR法对1999年8月至1999年12月35例乳腺癌 患者新鲜肿块中VEGF mRNA和骨髓KT-19 mRNA的表达进 南京医科大学博士学位论文 行检测；同时以免疫组化法对EMA和 KT检测骨髓微小转移 与RT．PCR法进行比较。 3、以 VEGF；砧禾 KDR·IV融合蛋白兔疫BALB／c小鼠，免疫后 小鼠脾细胞与Sp2／0骨髓瘤细胞进行融合，HAT培养基进行 选择性培养，用ELISA法进行筛选杂交瘤，用’HTdR掺入 法对制备的抗VEGF及其受体KDR单克隆抗体抗VEGF刺 激人脐带静脉血管内皮细胞的活性进行测定。 4、用人乳腺癌细胞株 MCF．7以 2 X 10‘个细胞数注入 6周龄雌 性BALB七甸 裸鼠右侧胸部皮下，建立起异种肿瘤种植模 型。种植后5天裸鼠被随机分成四组，分别以抗VEGF单克 隆抗体u0oUg，隔日一次x 14次人抗KD R单克隆抗体 （200ug，隔日一次X14 次）、5·Fu（320ug（16mg／kg），隔日 一次XS次）及生理盐水（0．Zml，隔日一次X 14次）对荷瘤 裸鼠进行腹腔注射。每5天由固定人员检测肿瘤长度和宽度， 代表肿瘤体积。种植后35天处死裸鼠，检测肿瘤体积、重量、 VEGF表达、MVD及微血管微观变化。 结果： l、在30例乳腺癌患者中20例兔疫组化检测VEGF阳性表达 （66石7％），与乳腺癌淋巴结转移、骨髓微小转移、MVD 呈正相关，而与雌激素受体状况无关。与原发肿瘤大小差 异不显著。 2、通过 RT－PCR法检测 35例乳腺癌中 29例 VEGF mRNA阳 性表达侣2．86％人 同样与乳腺癌淋巴结转移、骨髓微小转 5 南京医科大学博士学位论文 移呈正相关，与雌激素受体状况无关。但RT干CR法显示 VEGF与原发肿瘤大小呈正相关，与兔疫组化结果不一致。 同时结果显示RT－PCR法对骨髓微小转移的检测比免疫组 化法敏感。 3、制备的抗VEGF及其受体KDR单克隆抗体在体外试验中 能明显地抑制由VEGF诱导的内皮细胞增殖。 4、抗＊＊＊F及其受体KD R单克隆抗体和与5FU对裸鼠人乳 腺癌MCF7种植肿瘤的生长有抑制作用，和对照组间差异 有显著性，而抗VEGF抗体组与抗KDR抗体组间差别无显 著性，同时抗VEGF、抗KDR抗体和 5fu治疗可使肿瘤 新主血管数量减少。结论： l、VEGF在乳腺癌血管生成中起一重要促进作用。 2、VEGF表达可作为乳腺癌的一个重要病理学指标和判断预 后的因素。 3、中和VEGF和封闭其受体KDR可抑制裸鼠中人乳腺癌细 胞株MCF．7的生长。 4、临床和实验结果显示VEGF可作为抗肿瘤血管生成的靶目 标之一。