【摘 要】
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目的:探讨Sirt1对同型半胱氨酸致血管内皮细胞衰老的影响。方法:体外培养HUVEC,将细胞分为正常对照组、不同浓度Hcy组(50μM、200μM、500μM、1000μM、2000μM)、10mg/mL D-Gal组(阳性对照)、2000μM Hcy+50μM RSV组,培养24小时,通过CCK-8检测增殖活力、SA-β-Gal染色检测内皮衰老情况、细胞周期分析各组阻滞情况、DCFH-DA检测细
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目的:探讨Sirt1对同型半胱氨酸致血管内皮细胞衰老的影响。方法:体外培养HUVEC,将细胞分为正常对照组、不同浓度Hcy组(50μM、200μM、500μM、1000μM、2000μM)、10mg/mL D-Gal组(阳性对照)、2000μM Hcy+50μM RSV组,培养24小时,通过CCK-8检测增殖活力、SA-β-Gal染色检测内皮衰老情况、细胞周期分析各组阻滞情况、DCFH-DA检测细胞内ROS水平;PCR ELISA法检测细胞内端粒酶活性;Western-blot检测细胞Sirt1蛋白水平。结果:通过CCK-8检测提示,与对照组相比,各Hcy组细胞增殖活力随浓度增加而降低,RSV部分改善增殖活力;通过SA-β-Gal染色提示,与对照组相比,各Hcy组阳性率升高,具有一定的浓度依赖性,RSV可降低细胞SA-β-Gal的阳性率;根据细胞周期分析,与对照组相比,各Hcy组将细胞阻滞在G0/G1期,S期、G2/M期细胞比例明显降低,RSV可部分减少G0/G1期细胞数,提高S期、G2/M期细胞比例。在ROS检测中,Hcy组荧光强度高于对照组,具有一定的浓度依赖性。RSV预处理后可降低ROS水平。通过蛋白质免疫印迹和端粒酶活性检测,Hcy组Sirt1蛋白水平和端粒酶活性比对照组明显降低,RSV提高Sirt1蛋白水平和端粒酶活性。结论:Hcy可通过氧化应激促进内皮细胞衰老,降低端粒酶活性,RSV部分改善内皮细胞的氧化损伤和衰老程度,提高端粒酶活性,提示Sirt1可能对Hcy致内皮细胞衰老起到保护作用。
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