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目的在前期研究的基础上,通过体外实验探讨IL-17对B16细胞血管内皮生长因子(vascularendothelial growth factor, VEGF)-a表达水平和对B16细胞血管生成拟态(vasculogenic mimicry, VM)的影响,从而阐明IL-17对黑色素瘤血管生成的影响。方法体外培养小鼠黑色素瘤B16细胞,用不同浓度重组鼠IL-17处理细胞,设空白对照组。分别采用MTT法和ELISA法检测不同浓度IL-17对B16细胞增殖能力和VEGF-a表达水平的影响；通过Transwell迁移、侵袭实验,明胶酶谱法和三维培养实验观察不同浓度IL-17对B16细胞迁移、侵袭能力,MMP-2、MMP-9和VM形成能力的影响；通过Western-blot和免疫荧光染色法检测B16细胞中IL-17受体(IL-17receptor, IL-17R)的表达情况。结果1.MTT法检测结果显示,不同浓度(5、10、20、50、100ng/mL) IL-17处理组与对照组相比,B16细胞的增殖能力无明显变化(P>0.05)；ELISA法检测结果显示,不同浓度(10、50、100ng/mL)IL-17处理的B16细胞培养上清液中VEGF-a含量比对照组升高(P<0.05),呈浓度依赖性。2.观察不同浓度IL-17(10、50、100ng/mL)对B16细胞迁移、侵袭能力,MMP-2和MMP-9活性及VM的影响。Transwell迁移实验结果显示,不同浓度IL-17处理的B16细胞穿膜细胞数比对照组明显增多(P<0.05),呈浓度依赖性；Transwell侵袭实验结果显示,不同浓度IL-17处理的B16细胞穿膜细胞数比对照组明显增多(P<0.05),呈浓度依赖性；明胶酶谱法分析结果显示,不同浓度IL-17处理的B16细胞MMP-9的活性比对照组增强(P<0.05),呈浓度依赖性,lOng/mL IL-17组MMP-2活性无明显变化(P>0.05),50、100ng/mLIL-17组MMP-2活性增强(P<0.05)；三维培养结果显示,不同浓度IL-17处理的B16细胞体外VM形成能力与对照组相比无明显变化(P>0.05)。3.Western-blot检测结果显示B16细胞高表达IL-17R,免疫荧光染色显示B16细胞中可见IL-17R的阳性表达,IL-17R主要定位表达于胞膜和胞浆。结论1.IL-17可以诱导B16细胞分泌VEGF-a。IL-17不直接影响B16细胞的增殖。2.能力本研究中IL-17对B16细胞体外血管生成拟态无影响,但可通过增强MMP-2、MMP-9活性促进B16细胞迁移和侵袭,具有促进B16细胞转移的潜能。3.IL-17R表达于B16细胞中,IL-17可能通过IL-17R信号通路发挥其对B16细胞的上述调节作用,其具体机制尚待进一步研究。