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胃泌素(gastrin，GAS)是胃窦和十二指肠粘膜G细胞分泌的多肽类激素，主要生理作用是促进胃酸分泌和胃肠道粘膜的生长。研究显示胃泌素是胃肠道肿瘤自泌性的生长因子，通过促进肿瘤细胞增殖、抑制凋亡、刺激浸润以及和COX-2协同作用促进肿瘤生长。胃肠道肿瘤的抗胃泌素治疗分为分泌抑制、受体拮抗、反义寡核苷酸抑制和抗胃泌素抗体治疗。本课题的目的是开发一种基于脑膜炎球菌P64K蛋白的针对胃肠道肿瘤的胃泌素G17治疗性疫曲。 我们选用人胃泌素G17N端9个氨基酸的B细胞表位(Glu-Gly-Pro-Trp-Leu-Glu-Glu-Glu-Glu)作为靶位，这个表位为胃泌素G17和甘氨酸延伸型胃泌素G17所特有，因而产生的抗胃泌素G17抗体不会与G34和CCK发生交叉反应。 P64K蛋白是来自于脑膜炎奈瑟氏球菌的一种外层膜蛋白。P64K蛋白作为载体蛋白可以帮助激活特异性体液免疫反应，近年来研究显示P64K较传统载体蛋白BSA、TT等有更好的免疫增强效果。我们选择P64K蛋白，通过一段多肽交联桥(Gly-Gly-Gly-Gly-Ser)与G17的B细胞表位交联或者是构建G17P64K融合蛋白来作为治疗性疫苗，诱导机体产生抗胃泌素G17的抗体从而中和并清除内分泌或者是源自肿瘤细胞自分泌的胃泌素，达到治疗胃肠道肿瘤的目的。 我们从脑膜炎球菌中通过PCR克隆得到了P64K基因，构建了P64K基因和G17P64K基因的pET28a表达载体，并在大肠杆菌中得到了高表达。目的蛋白经硫酸铵沉淀、疏水层析、分子筛层析和阴离子层析得到纯度超过90％的样品。FMOC同相法化学合成多肽pyro-Glu-Gly-Pro-Trp-Leu-Glu-Glu-Glu-Glu-Gly-Gly-Gly-Gly-Ser-Cys。MBS法交联多肽与载体蛋白P64K及DT。制备抗胃泌素G17抗体试验分为5组：合成多肽组，P64K蛋白组，DT多肽交联组、P64K多肽交联组和G17P64K融合蛋白组，分别加氟氏佐剂后免疫兔。经两次加强免疫后在DT多肽交联组和P64K多肽交联组动物血清中产生了高滴度的抗胃泌素G17抗体。细胞水平的体外活性评价试验显示抗体有较好的抑制肿瘤生长的生物学活性。