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背景近年来,T细胞免疫抑制方面有着明确功能的新的靶标分子出现,即免疫检查点分子T细胞激活抑制物免疫球蛋白可变区结构域(VISTA),前期的动物实验证实:封闭了 VISTA靶点、将VISTA与其他免疫检查点抑制剂,例如PD-1(程序性死亡因子)联合使用都能起到杀伤肿瘤的作用。VISTA与PD-L1具有同源性,且VISTA与PD-1/PD-L1有着不同信号通路,来抑制T细胞免疫活性。CD8+T细胞是肿瘤浸润淋巴细胞(TILs)中最主要的效应细胞,肝癌中CD8+TILs与VISTA表达存在怎样的关系?两者在肝癌预后及总生存期的相关性又如何?是本研究的焦点所在。近年来,在抗PD-1或抗CTLA-4的肿瘤免疫治疗,出现获得性抵抗的机制中,研究发现VISTA可能代表另一个补偿性的抑制性通路。VISTA免疫检查点已逐渐成为肿瘤免疫抑制剂治疗研究的热点,并在肺癌、胃癌、黑色素瘤、口腔鳞状细胞癌、前列腺癌等肿瘤中已有相关研究报道,而在人类肝细胞癌组织中VISTA蛋白的表达情况及临床意义未见相关报道。2017年4月发表在lancet一篇关于PD-1阻滞剂nivolumab在晚期肝癌临床实验的文献,报道了 nivolumab作为一线及二线用药的安全性及有效性,然而作为一线用药客观缓解率为23%。并有25%受试者出现治疗相关副作用,获得性抵抗日益增加。结合VISTA和PD-1/CTLA-4阻滞可能是肝癌治疗的一个有前途的新选择。本文通过探讨VISTA与CD8蛋白的表达相关性及其和原发性肝癌的临床病理特征相关性;探讨基于VISTA/CD8表达状态的肝癌免疫微环境构建及其免疫微环境下的总生存期;探讨肝癌肿瘤细胞中VISTA可能的生物学功能。为VISTA免疫检查点在肝癌免疫治疗研究发展提供参考依据。方法以183例肝细胞癌患者肿瘤组织的连续病理切片的微阵列(TMAs)作为实验组,通过免疫组织化学(IHC)方法对183例原发性肝癌患者的肿瘤组织中VISTA和CD8+蛋白表达进行分析。以癌基因(TCGA)数据库作为验证队列,从372例原发性肝癌患者中提取VISTA和CD8 +mRNA表达量数据。分析在肿瘤细胞、免疫细胞和肿瘤微环境下的VISTA不同表达情况,与病理变量间的关系,及与肝癌患者生存预后的相关性。通过MTT实验,平板克隆实验及流式细胞术,初步研究肝细胞癌患者肿瘤细胞中VISTA蛋白可能的生物学特性。基于VISTA/CD8表达状态,对肝癌免疫微环境进行分类,分析与预后的相关性。结果1.原发性肝癌中VISTA的表达与病理组织分级(P=0.038)、肝硬化(P=0.011)和CD8+肿瘤浸润淋巴细胞具有显著相关性(P<0.001),其中肿瘤细胞高表达VISTA预示肝癌患者更小的肿瘤及更低的肝硬化发生率。2.基于VISTA/CD8表达状态,将原发性肝癌免疫微环境分为4种免疫亚型:VISTA+/CD8+(16.9%,31/183),VISTA+/CD8-(12.6%,23/183),VISTA-/CD8+(16.4%,30/183),和VISTA-/CD8-(54.1%,99/183)。Kaplan Meier 曲线显示:在肿瘤细胞 VISTA 呈阳性表达的患者总生存期比呈阴性表达者显著延长(74个月vs41个月,P=0.037);VISTA+/CD8+双阳性表达的总生存期比其它免疫分型显著延长(74个月vs53个月vs35个月,P=0.023),预示获得更好的生存预后。3.肝癌细胞高表达VISTA体外抑制肿瘤细胞的生长,抑制细胞周期的进展。结论1.原发性肝癌VISTA和CD8+TILs的表达呈正相关性,VISTA蛋白的表达具有细胞特异性。2.本组研究认为:可以联合VISTA和CD8+TILs表达来反映肝癌肿瘤免疫微环境;肝癌组织中VISTA+/CD8+的双阳性表达对于肝细胞癌患者具有更好的生存预后。3.表达VISTA的细胞类型不同,表现出不同的预后及临床意义,HCC肿瘤细胞中VISTA可能具有抑癌基因功能。