本文主要介绍了利用荧光共振能量转移技术在活细胞生理条件下对细胞增增殖与凋亡通路中的蛋白进行研究。 论文首先对荧光共振能量转移技术及其在分子生物学中的应用,以及激光共聚焦显微镜原理及应用进行了概括性介绍。综述了近几年来荧光共振能量转移技术在蛋白质—蛋白质相互作用研究中的进展。 传统检测PKA酶活性需要对细胞进行破碎等操作,然后利用提取的胞浆在试管中进行,有很大缺陷。我们基于荧光共振能量转移技术使用了一个可以在活细胞内生理条件下检测PKA酶活的AKAR探针,对PKA酶活性进行实时动态的观察,弥补了传统检测PKA酶活性的缺点。 为了在活细胞生理条件下研究细胞凋亡蛋白Bid与14-3-3蛋白间的相互作用,基于荧光共振能量转移技术本文使用了Bid-CFP融合蛋白(国外作者赠送),自己构建了YFP-14-3-3融合蛋白。通过在活细胞内利用荧光共振能量转移技术原理对Bid与14-3-3蛋白相互作用进行动态实时观察,发现两者相互作用的时空关系,提供了两者相互作用很好的实时证据。 最后本文对所做的研究工作进行展望,认为FRET技术是一个很好的可以在活细胞生理条件下检测细胞内分子间相互作用的动态行为的一项技术,有着很大的发展前景及应用空间。