仔猪呼吸道疾病综合征的病原检测及上下呼吸道微生物群落宏基因组学分析

来源 :江西农业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:eastliu33
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在当前的规模化养殖猪群中,猪呼吸道疾病综合征(Porcine Respiratory Disease Complex,PRDC),是普遍易发,且可造成经济损失严重的疾病,由细菌、病毒、支原体、寄生虫、不良饲养管理条件及易感猪群等多因素相互作用共同引起。PRDC可感染各种年龄段的猪群,但保育仔猪因断奶应激、母源抗体下降、自身免疫系统未发育成熟等因素是PRDC的主要发病猪群。本实验采用PCR方法对2014年~2018年江西省的994份患有PRDC的发病保育仔猪样品进行PRDC相关病毒检测,并针对其主要病原进行进行遗传进化分析。同时,运用高通量测序技术深入探究PCV2感染对仔猪上、下呼吸道微生物菌群结构的影响。主要研究结果如下:1、在检测的994份发生PRDC的仔猪样品中,圆环病毒2型(PCV2)的阳性率均最高,2014~2018年的检出率在53.4%~72.1%之间,平均阳性率为65.7%;其次为蓝耳病病毒(PRRSV),5年平均阳性率为42.0%(32.9%~56.9%);PRV的平均检出率为7.4%(5.1%~11.7%);猪瘟病毒(CSFV)的平均检出率为8.4%(0.0%~25%);新现的圆环病毒3型(PCV3)5年平均检出率为3.7%(0.0%~13.0%)。该结果说明,PCV2和PRRSV是当前PRDC的主要检出病原,新现的PCV3感染率有呈逐年上升的感染趋势。2、为对江西地区猪群PRDC主要病毒的遗传进化进行分析,本试验扩增了18株PRRSV GP5基因,5株PCV2及7株PCV3的全基因组。基于GP5基因的进化树分析结果表明,18株PRRSV均属于美洲型毒株,其中13株属于基因Ⅰ亚型、4株毒株属于基因Ⅲ亚型、1株属于基因Ⅳ亚型。核苷酸序列同源性比对发现,本试验扩增的江西省的PRRSV GP5基因彼此之间的同源性都在81%以上,而与其他国家或地区的同源性为61.6%~100%;18株PRRSV GP5基因彼此之间氨基酸序列的同源性为81.7%~100%,与其他国家或地区的氨基酸序列同源性最低的为54.3%、最高的为98.0%。本实验获得的5株PCV2毒株基因组全长均为1,767 bp。进化树分析表明,5株PCV2均属于2d亚型毒株。Cap基因同源性分析发现,本实验扩增的PCV2毒株之间核苷酸序列同源性均大于99%,氨基酸序列的同源性为98.6%~100%;与其他参考株的核苷酸同源性为82.1~98.9%,氨基酸同源性为81.2%~99.2%。本试验扩增的7株PCV3基因组全长均为2,000 bp。系统进化树显示,7株江西株分属于两个分支,其中2株属于a1亚型,5株属于b亚型。同源性分析表明,本实验扩增的7株PCV3的Cap基因彼此之间核苷酸序列的同源性均高于98%,氨基酸序列同源为98.3%~100%,与其他国家或地区的PCV3 Cap基因的核苷酸序列同源性97%~100%,氨基酸序列同源性为98%~100%。3、为探索PCV2对保育仔猪上、下呼吸道菌群的影响,本试验借助Illumina Mi Seq测序平台,对20份患PRDC及健康保育仔猪呼吸道拭子及下呼吸道黏液样品进行16S r RNA V3-V4区测序,共获得938,052条有效序列。物种分析表明,在门水平上,无论是健康仔猪还是PCV2感染仔猪,上呼吸道菌群以变形菌门(Proteobacteria)、蓝藻门(Cyanobacteria)、厚壁菌门(Firmicutes)和拟杆菌门(Bacteroidetes)为主,超过85%的细菌属于这4个门。健康猪上下呼吸道菌群在蓝藻门(Cyanobacteria)、厚壁菌门(Firmicutes)、软壁菌门(Tenericutes)丰度上存在显著差异;在下呼吸道菌落组成上,感染仔猪下呼吸道变形菌门(Proteobacteria)的丰度极显著的高于健康仔猪下呼吸道该门菌群丰度,但感染仔猪下呼吸道软壁菌门(Tenericutes)的丰度极显著的低于健康仔猪下呼吸道该门菌群丰度。在种水平上发现副猪嗜血杆菌(Haemophilus parasuis)和吲哚放线菌(Actinobacillus indolicus)这两种与呼吸道疾病相关的细菌在PCV2感染仔猪的下呼吸道丰度显著高于其在健康仔猪下呼吸道中的丰度。结果表明,PCV2感染导致仔猪上下呼吸道菌群发生了显著变化,特别是与呼吸道疾病相关的病原菌的丰度也发生了显著变化。
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