本实验对昆明白小鼠胚胎干细胞分离、培养、传代以及鉴定进行了研究。胚胎培养使用了两种方法，其一：以小鼠胎儿成纤维细胞为饲养层，TCM199+10％FBS为胚胎培养基，在37℃，5％C02，100％湿度条件下，培养胚胎4-6天后，发育至孵化囊胚阶段。其二：将小鼠胚胎培养在TCM199+10％FBS+0.1ng/mLLIF胚胎培养基中，于相同的培养条件下，无饲养层培养1-2天，发育到孵化囊胚阶段。两种方法获得的囊胚贴壁率分别为43.48％和31.25％，差异不显著(P＞0.05)。 孵化囊胚贴壁增殖，内细胞团呈圆柱状生长。将圆柱状内细胞团用0.125％Trypsin+0.02％EDTA消化液反复消化，分离获得3-4个细胞的小团块，将其培养在有饲养层和无饲养层培养体系中，均获得了类胚胎干细胞集落。 从培养的囊胚中分离获得的类胚胎干细胞集落，经传代培养获得了5株胚胎干细胞株，在体外可传代培养到7代，冷冻保存复苏后，干细胞仍能存活、增殖。干细胞集落呈克隆状生长，边缘光滑，细胞致密地聚集在一起，类似鸟巢状，细胞间界限不清。经碱性磷酸酶染色，呈现强阳性。证明为类胚胎干细胞集落。