探究microRNA-210在急性脑损伤中的调控机制

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第一部分小鼠脑损伤模型的构建及miRNA-210表达评估目的:脑损伤小鼠的建模及验证模型。方法:1)使用雄性C57BL/6小鼠进行腔内大脑中动脉闭塞(middle cerebral artery occlusion,MCAO)建模;2)Longa及Bederson的5分制法进行小鼠建模后神经功能损伤评分;3)Morris水迷宫实验测试小鼠的行为能力;4)TTC染色及梗死面积测量;5)免疫组织化学法分析梗死情况;结果:1)小鼠MACO建模苏醒之后对小鼠进行脑神经损伤及水迷宫检测小鼠脑损伤状态,神经功能损伤评分及Morris水迷宫实验结果表明,本研究小鼠MCAO模型建模成功,小鼠的损伤属于轻度-中度损伤;2)TCC染色结果表明,模型组小鼠均出现不同程度的脑梗死,梗死面积各不相同且与非损伤区界限不明显,但可以明显区分损伤组织,梗死主要存在皮质部分,严重性梗死脑坏死区延伸至纹状体邻近新皮质、杏仁核和下丘脑的大部分;3)通过MAP2免疫反应性的缺失和衰减来确定神经元损伤的程度,纹状体和新皮质早在再灌注后可检测到MAP2表达减少,此外,还可以观察到HSP72和HSP27的表达;损害周围区包括海马、丘脑和下丘脑。同侧和对侧扣带回和脾后皮质以及对侧海马以及隔区被确定为远隔受累区域。HSP72在新皮质中几乎检测不到表达,且仅限于梗死核心附近的极少数神经元。部分小鼠锥体细胞层海马HSP72表达。4)对手术后24小时、3天和7天的小鼠两侧脑组织进行miRNA-210的基因定量检测,取其平均值作为统计的标准,研究结果发现,相较于对照组假手术的小鼠,模型组小鼠的miRNA-210的表达水平显著提高,在第三天达到最高水平,此后呈现下降趋势,两组具有显著性差异,P0.05;2)NSE、S100B以及miRNA-210在MCAO患者中均呈现表达上调的情况,且随着MCAO程度的加深表达水平相应提高;3)MCAO患者中的miRNA水平,并选取三个相对表达水平的cut off值作为确诊的标准(0.5、0.6、0.7),基于MCAO患者中平均检测水平与对照组健康受试者的水平进行分析,发现,miRNA-210相对表达水平设置为0.5时,确诊人数最多为42人;5)miRNA-210截断值为0.5时进行miRNA-210的诊断性能展开研究,经计算,miRNA-210诊断的灵敏度(Sensitivity)为84%、特异度(Specificity)为90%、阳性预测值(Positive predictive value,PPV)为89.4%、阴性预测值(Negative predictive value,NPV)为84.9%、诊断效率(Diagnostic efficiency)为87%。结论:miRNA-210在脑损伤患者中具有良好的诊断性能,有望作为新生诊断生物标志物发挥更大的价值。
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