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Tec酪氨酸蛋白激酶是一种非受体酪氨酸蛋白激酶,它是一种细胞质蛋白,主要表达在免疫相关组织和肝细胞中,Tec参与G蛋白偶联受体和白介素介导的信号通路,调节诸多生物进程,而且还是T细胞受体信号重要的调节分子。本文实验中,在七鳃鳗血液cDNA库中成功克隆Tec ORF区序列。七鳃鳗Tec(Lja-Tec)序列包含1923bpORF区,69bp 5’UTR区以及1037bp 3’UTR区。对其序列进行功能结构域预测,Tec氨基酸序列包含了PH结构域、Btk结构域、SH3结构域、SH2结构域和TKD激酶结构域。而且,对Tec序列进行生物信息学分析,并选取24个物种从哺乳动物到无颌类动物建进化树,以及MEME软件分析其进化历程。发现七鳃鳗Tec位于脊椎动物进化的最低处,符合进化规律。利用RT-PCR法检测Tec基因水平上在七鳃鳗髓样小体、鳃、白细胞、肾和心免疫相关组织中的分布情况,发现刺激后鳃和白细胞中Tec的转录情况明显上调。同时,用western blot分析了Tec转录水平上七鳃鳗刺激前后在以上组织中的表达情况,发现刺激后白细胞的表达明显上调。表明了Tec可能参与免疫应答,在七鳃鳗适应性免疫中起到重要作用。构建了Pet32a(+)-Tec表达载体,转入表达感受态E.coli BL21中进行表达,然后用0.1mmol/LIPTG、30?C诱导蛋白表达,得到了重组蛋白Tec,超声破碎后,Tec蛋白主要在沉淀中表达,为不可溶蛋白。用包涵体纯化方法,经组氨酸亲和层析纯化后,得到纯化的重组蛋白Tec。利用Tec抗体经western blot鉴定Tec重组蛋白和天然蛋白,结果发现Tec蛋白在七鳃鳗白细胞中混合菌刺激前后变化比较明显。接着研究了免疫沉淀,检测与Tec相互作用蛋白,结果还需进一步验证。免疫荧光检测了Tec在白细胞中的定位,结果显示Tec为胞质蛋白。综上所述,以上的研究在七鳃鳗Tec功能或免疫机制研究中提供了重要线索。