论文部分内容阅读
赖氨酸修饰的交联壳聚糖微球无毒、有生理活性、可降解,是亲水性良好的固定化酶载体。接枝赖氨酸作为“柔性手臂”,可减轻对酶蛋白构象的扰动并扩大其作用区域。共固定化酶使催化单一反应的酶有机组合,实现连续、顺序的化学反应,有重要学术价值和广泛应用潜力。
本研究在赖氨酸修饰的交联壳聚糖微球上,以戊二醛做交联剂,采用吸附-交联的方法共固定化葡萄糖氧化酶GOD和过氧化氢酶CAT,优化的固定化条件是:GOD/CAT=1/1.4(U/U),酶量:戊二醛:载体氨基的摩尔比=1∶8.5∶4下,低温吸附平衡,室温交联3h。以GOD计的固定化酶活力为15.3U/mg、活力回收67.1%。
共固定化酶的主要酶学性质以GOD计是:Km=31.02mmol/L,为游离酶的1.29倍,最适pH4.0,最适温度42℃;60℃半衰期为54.4h,室温(25℃)重复使用半衰期24次,4℃贮存半衰期231天。
以开放式共固定化酶柱式反应器系统处理葡萄糖溶液,在最佳底物浓度3%,流速0.8ml/min下连续稳定氧化时间长达11.5h,在循环系统中重复使用4次最大转化率达到45%,无过氧化氢累积,产物葡萄糖酸对共固定化酶氧化能力有抑制作用。以该柱式反应器连续水解含0.125%葡萄糖的木糖醇结晶母液,对葡萄糖的最大转化率35.2%。