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猪圆环病毒2型(Porcine circovirus type2，PCV2)是引起仔猪断奶后多系统衰竭综合征(PMWS)的主要病原，分为PCV2a、PCV2b和PCV2c三种基因亚型。我国优势流行株为PCV2b，目前安徽地区PCV2分离株也均属于PCV2b，分属于PCV2b-1A、PCV2b-1B和PCV2b-1C三个不同基因簇，研究发现，PCV2b-1A和PCV2b-1B的氨基酸序列总体上较为一致，但PCV2b-1C的氨基酸序列与PCV2b-1A、PCV2b-1B相比变化较为明显，发生改变的位点主要集中在ORF2的两个免疫反应区。为探讨同一基因亚型不同基因簇的PCV2安徽株免疫原性是否存在差异，本实验通过以下工作内容展开研究，为PCV2疫苗的研究与选择、PCV2的致病机理与防控措施提供理论依据。选择同一基因亚型不同基因簇的3株PCV2安徽株(PCV2-DY0801为PCV2b-1A，PCV2-BH0801为PCV2b-1B，PCV2-XC0801为PCV2b-1C)感染小鼠，通过ELISA方法和流式细胞术检测感染小鼠血液中IgG水平、T细胞亚群数量和Th1/Th2细胞因子含量的变化。参照GenBank登陆的PCV2ORF2基因的特异性引物，采用PCR扩增ORF2基因，克隆到pET-32α表达载体，构建重组质粒pET-32α-ORF2，并转化至大肠杆菌Rosetta (DE3)中诱导表达3株PCV2ORF2编码的Cap蛋白，通过免疫印迹试验鉴定重组蛋白的免疫活性，纯化的重组蛋白加弗氏佐剂，乳化后用于免疫小鼠，检测免疫后小鼠抗体IgG水平和Th1/Th2细胞因子含量的变化，从而观察3株PCV2安徽株免疫原性的差异。结果显示：3株PCV2安徽株感染小鼠后均产生较高水平的IgG，其中BH0801组在第21d IgG水平显著高于XC0801组(P＜0.05)；3组感染组外周血中CD4+、CD8+和CD4+CD8+细胞数量与对照组相比均明显减少，其中BH0801组在感染后第14dCD4+数量显著低于XC0801组(P＜0.05)，但感染后期CD4+数量又高于XC0801组。3组感染组血清中IL-4和IL-10含量显著升高，与对照组相比差异显著(P＜0.05)；同时IFN-γ水平从感染后第7d时升高，第21d和28d时下降并显著低于对照组(P＜0.05)。其中BH0801组小鼠血清中IL-2含量在第14d显著高于XC0801组，第21d显著高于DY0801组和XC0801组(P＜0.05)；而XC0801组在感染小鼠后IL-10含量第7d时显著高于DY0801组，第14d时显著高于BH0801组(P＜0.05)。3株PCV2安徽株ORF2基因的克隆与表达中诱导的3株重组表达菌经SDS-PAGE电泳可见大小约为40kD的目的蛋白。免疫印迹试验显示3组重组蛋白与PCV2阳性血清均能够发生特异性反应，具有良好的免疫原性。3株PCV2安徽株重组蛋白免疫小鼠后血清中IgG水平显著高于对照组(P＜0.05)；血清中IL-4含量仅XC0801组在二免后显著高于对照组(P＜0.05)；而IFN-γ、IL-2和IL-10含量均有所升高，与对照组相比差异不显著(P＞0.05)；3组免疫组之间IgG水平和细胞因子含量也无显著差异(P＞0.05)。结果表明：3株PCV2安徽株均能诱导机体产生较高水平的体液免疫应答，但细胞免疫应答受到抑制，且诱导体液和细胞免疫应答的能力存在一定差异，其中PCV2-BH0801与PCV2-XC0801免疫应答差异较明显。3株PCV2安徽株Cap蛋白均具有良好的免疫原性，能诱导机体产生较高水平的体液免疫应答，但诱导体液和细胞免疫应答能力无明显差异，PCV2-XC0801与PCV2-BH0801和PCV2-DY0801相比ORF2氨基酸序列位点发生的改变未导致其编码Cap蛋白免疫原性的明显改变。因此，同一基因亚型不同基因簇的PCV2安徽株免疫原性存在一定的差异，但Cap蛋白免疫原性无明显差异，造成毒株间免疫原性存在差异的原因不只是与ORF2氨基酸序列改变有关，还与其他因素有关。