豌豆（Pisum sativum L.）是豆科、豌豆属一年或越年生草本植物，是重要的粮食、蔬菜、饲料、绿肥和养地作物。近年，传统的种植和育种方法已不能满足产量的需求，利用植物组织培养技术建立其再生体系和进行抗逆性研究，将为日后的转基因、无性繁殖以及在盐碱地种植提供科学依据和技术支撑。本实验研究包括：通过对外植体、培养基、植物激素、培养条件等因素的筛选，建立再生体系，和对豌豆的幼苗进行盐胁迫和NO缓解盐胁迫的抗逆性研究。结果如下:一、豌豆再生体系的建立1、豌豆组织培养最佳外植体是茎段；诱导愈伤组织的最适培养基是MS+1.0mg·L^-12,4-D+0.2mg·L^-16-BA；最佳诱导接种方式为横放于培养基表面；不同光质下诱导愈伤，蓝光促进，黄光抑制；诱导培养基只附加TDZ，未形成愈伤组织，最终出现褐化，也未能在切口处形成体胚或不定芽，如果在TDZ存在的基础上附加2,4-D，可形成愈伤组织，但诱导率低而且愈伤组织不利于后期分化。2、愈伤组织增殖培养基为：MS+1.0mg·L^-1NAA+1.0mg·L^-16-BA；茎段在MSB5+0.2mg·L^-1NAA+2.0mg·L^-16-BA下分化率最高，达到26.21%，而子叶在MS+0.5mg·L^-1NAA+2.0mg·L^-16-BA下分化率达到最高，为14.80%；再生无根苗在生根培养基1/2MS+0.5mg.L^-1NAA下生根率最高，达到66%。3、利用豌豆种子实生苗不定芽直接诱导的最适培养基为：MS+0.2mg.L^-1NAA+1.0mg·L^-16-BA，平均不定芽数可达3.20个；最佳种子实生苗生根培养基为1/2MS+0.2mg.L^-1NAA，生根率可达85%，且随着种苗生理年龄增大而降低。二、豌豆抗逆性研究1、以“陇豌一号”和“S4008”2个豌豆品种为材料，利用不同浓度的NaCl溶液处理种子进行发芽实验，研究豌豆种子萌发及幼苗生长对NaCl胁迫的响应。结果表明：10mmol·L^-1NaCl胁迫可促进种子萌发，2个豌豆品种的发芽率、发芽势、胚芽和胚根长、幼苗鲜重和干重、相对含水率、叶绿素含量均显著高于对照（p<0.05）；25mmol·L^-1NaCl处理略高于对照，但差异不显著；发芽指数总体随着盐浓度增高而降低。高浓度NaCl(50、100、200mmol·L^-1)则显著抑制了发芽率、发芽势、胚芽和胚根长、幼苗鲜重和干重、相对含水率以及叶绿素含量（p<0.05），且胚根下降趋势大于胚芽；丙二醛含量和细胞膜透性随着盐浓度增加显著上升（p<0.05）；脯氨酸含量则先降低后升高（p<0.05），25mmol·L^-1处理达到最小值。极高浓度NaCl(300mmol.L^-1)胁迫下，种子基本不发芽。综合评定：胚根是对盐分胁迫较敏感的部位，S4008抗盐能力>陇豌一号。2、用NO供体硝普钠、NO清除剂c-PTIO及硝普钠类似物亚铁氰化钠处理“陇豌1号”豌豆幼苗，研究外源NO对盐胁迫下豌豆幼苗生长的影响。结果表明：添加外源NO能明显使盐胁迫下豌豆幼苗胚芽和胚根长、幼苗干重、根冠比及叶绿素含量增加（p<0.05），可溶性蛋白和可溶性糖含量升高，豌豆幼苗叶片SOD、POD和CAT活性增加（p<0.05），叶片质膜相对透性降低，还能减缓MDA含量的上升并提高脯氨酸含量。而NO类似物亚铁氰化钠对盐胁迫下豌豆幼苗生长及氧化损伤无明显作用，NO清除剂c-PTIO加剧了盐胁迫对豌豆幼苗生长的抑制和氧化损伤，而添加外源NO能缓解c-PTIO的抑制效应。盐胁迫下，豌豆幼苗对外源NO和内源NO均产生了生理生化响应。