研究背景随着医学水平的进步和人们生活质量的提高,对眼后节疾病的研究、诊断和治疗也达到了一个新的高度。如老年性黄斑变性、色素层炎、高度近视、糖尿病视网膜病变、中心性渗出性脉络膜视网膜病变和视网膜血管阻塞等,采用积极的局部药物治疗是提高预后视力的保障,而玻璃体腔药物注射也日渐成为眼科临床上最常用的方法之一。玻璃体腔药物注射能使药物直接作用于眼后节,避免了全身用药带来的不良反应,同时也避免了血眼屏障对药物传递的影响。因此在治疗眼后节疾病时能使更多剂量的药物到达病变部位,从而取得良好的疗效。但是玻璃体腔药物注射同时也存在一些缺陷,如进入眼球带来的损伤,造成玻璃体积血、视网膜脱离、并发性白内障、眼内炎等并发症。针对这个缺陷,有各种非穿透眼球壁的方法的研究,如球周注射、脉络膜下腔注射、电离子透入疗法等。由于眼后节慢性疾病的病程长和药物迅速的扩散和代谢,常常需要多次重复进行玻璃体腔药物注射。针对这个问题,有各种延长药物作用时间的方法的研究,如巩膜塞、眼内植入物、缓释剂等。另外,由于眼球是一个密闭的容积固定的系统,所以在玻璃体腔药物注射时只能是极小的药物剂量,即使小剂量药物也常常会有眼压的骤然升高、眼内物的返流、注射器的药物残留等情况出现。眼压的骤然升高会影响视乳头和视网膜的血液供应,这种情况可能会给本身具有血管疾病或者是既往有青光眼病史的患者带来进一步的损害,而与眼内压升高相关的眼内物的返流和注射器内药物残留可能导致玻璃体嵌顿和药物剂量不准确。但是,通过临床观察和文献阅读我们发现这种眼压升高通常会在短时间内下降至正常。于是我们设想是否眼球存在着眼压自身调节机制,药物能否通过一小段时间以缓慢的速度进入玻璃体腔而保持眼压平稳?我们也设想是否通过这种方法能够提高药物剂量的准确性和调节药物剂量的大小?因此,本研究中我们设计动物模型观察使用输液泵进行玻璃体腔药物泵入的可行性和优缺点,以拓展眼后节药物传递的方法。目的探索兔眼玻璃体腔药物泵入的方法；比较不同给药方式的差别；观察玻璃体腔药物泵入的药物扩散和药物浓度；研究玻璃体腔药物泵入对视网膜功能和结构的影响。方法1.玻璃体腔药物泵入初步设计：选用胰岛素泵作为输液泵,选用与其配套的连接输液管的27G针头,以0.06%台盼蓝溶液为输入液。新西兰兔24只,分A、B、C、D4组,分别于30分钟内向玻璃体腔泵入50、100、150、200μL台盼蓝,每组6眼。分别于0、5、10、15、20、25、30分钟和出针后监测眼压,并观察穿刺口返流、术中眼球变化和术后1周眼部并发症。2.不同给药方法的比较：根据结果1选择进针4mm30分钟泵入100μL (B组)为参照设计E、F、G组。新西兰兔18只,分3组(即E、F、G组),每组6眼,各组均使用27G针头玻璃体腔内进针6mm。E组玻璃体腔注射100μL台盼蓝；F组：1分钟内向玻璃体腔快速泵入100μL台盼蓝,30分钟后出针；G组：30分钟内向玻璃体腔泵入100μL台盼蓝。监测眼压,观察穿刺口返流、注射器中药物残留、术中眼球变化和术后1周内眼部并发症。3.不同分子量药物不同给药方法眼内药物浓度检测：新西兰兔72只,分6组,每组12只24眼。前3组以0.01%的荧光素钠(分子量为376.28)溶液为输入液,左右眼两两配对为进针4mm30分钟玻璃体腔泵入100μL荧光素钠(4mm SF泵入组)、进针6mm30分钟玻璃体腔泵入100μL荧光素钠(6mm SF泵入组)和进针6mm玻璃体腔注射100μL荧光素钠(SF注射组),分别于第1、3、6、18小时处死动物(每个时间点每组6眼),检测前房液和玻璃体液荧光强度。后3组以1%的异硫氰酸荧光素葡聚糖(分子量为150kDa)溶液为输入液,左右眼两两配对为进针4mm30分钟玻璃体腔泵入100μL异硫氰酸荧光素葡聚糖(4mm FD泵入组)、进针6mm30分钟玻璃体腔泵入100μL异硫氰酸荧光素葡聚糖(6mm FD泵入组)和进针6mm玻璃体腔注射100μL异硫氰酸荧光素葡聚糖(FD注射组),分别于第1、3、9、18天处死动物(每个时间点每组6眼),检测前房液和玻璃体液荧光强度。4.不同给药方法对视网膜功能和结构的影响：12只新西兰兔随机分为2组,每组6只12眼。第1组左眼进针6mm30分钟玻璃体腔泵入100μL平衡盐溶液；右眼进针6mm玻璃体腔注射100μL平衡盐溶液。第2组左眼进针6mm1分钟玻璃体腔快速泵入100pL平衡盐溶液；右眼正常对照眼。分别于第1、4、7天行3次治疗,于治疗前,第1次和第3次治疗30分钟后行视网膜电图检查,于第7天行眼球摘除,行视网膜切片光学显微镜下观察视网膜的组织形态结构。结果1.A、B、C、D组玻璃体腔药物泵入过程中的平均眼压分别是17.65±2.56、25.19±1.76、29.13±4.38和39.77±8.54mmHg,单个时间点的最高眼压分别是19.44±4.71、26.89±2.54、32.78±2.92和48.78±4.53mmHg。4组均观察到前房有台盼蓝出现,C组的部分兔眼和D组的全部兔眼可以观察到随着眼压的升高有轻到中度的角膜水肿。2.E组玻璃体腔药物注射后的眼压是46.06±7.12mmHg,注射器内药物残留约10到40μL。F组玻璃体腔药物快速泵入后的眼压均大于60mmHg,但30分钟后眼压均小于20mmHg。G组在药物泵入时的平均眼压为25.27±1.85mmHg,但有2眼晶状体损伤。3.所有30分钟玻璃体腔泵入100μL药物的96只眼的平均眼压为25.11±3.94mmHg。4mm SF泵入组的前房液荧光强度在第1、3、6小时比6mm SF泵入组和SF注射组高,差异有显著性(p<0.05)；4mm FD泵入组的前房液荧光强度在第1天比6mm FD泵入组和FD注射组高,差异有显著性(p<0.05),表明进针较浅时药物容易从前房流失。6mm SF组玻璃体液荧光强度在第1、3、18小时比4mm SF泵入组高,差别有显著性(p<0.05)；6mm FD泵入组玻璃体液荧光强度在第9、18天比4mm FD泵入组高,差异有显著性(p<0.05),表明进针的深度与玻璃体腔药物浓度相关。6mm SF泵入组玻璃体液荧光强度在第1、3、18小时比SF注射组高,差异有显著性(p<0.05)；而6mm FD泵入组玻璃体液荧光强度在各时间点与FD注射组相比,差异均无显著性(p>0.05)；且SF注射组和FD注射组注射器内药物残余量分别为25.00±11.801μL和14.33±5.631μL,两组间比较差别有显著性(p<0.05),表明玻璃体腔药物注射时可能小分子药物较大分子药物更易于在注射器内残留。4.各组视网膜电图暗视视杆反应b波振幅、暗视最大混合反应b波振幅和暗室震荡电位波幅值治疗前,第1次治疗后和第3次治疗后的结果采用重复测量资料的方差分析,均无统计学差异(P>0.05)。各组视网膜组织切片在光学显微镜下未见明显异常,各层细胞完整、结构清晰。结论1.兔眼以合适的速度持续向玻璃体腔泵入药物时能较好的维持眼压平稳,具有良好的耐受性。2.与玻璃体腔药物注射相比,兔眼玻璃体腔药物泵入能较准确地控制药物剂量。3.兔眼玻璃体腔药物泵入进针深度不同时,无论分子量大小,前房和玻璃体的药物浓度均有差别。4.兔眼玻璃体腔药物泵入未发现显著的视网膜的功能和显微结构的损害。