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J亚群禽白血病病毒(ALV-J)和H9N2亚型禽流感病毒(H9N2 AIV)是两种严重危害世界各国包括我国的养禽业,并对其造成巨大经济损失的禽类病毒。目前这两种病毒的传统检测方法大都存在处理周期长、成本高,有时检测结果易出现假阳性等缺点。另外,转基因作物的大量种植造成了生态系统方面的担忧,转基因食品对人类的健康是否具有危害也存在较大争议。而当前现有的转基因蛋白的检测技术存在着操作复杂、耗时较长、成本高、重现性和准确性差的缺点。因此,本文将采用具有免标记样品、实时在线监测、灵敏快速检测的突出特点的表面等离子体共振(SPR)生物传感器检测这两种禽类病毒和转基因蛋白Cry1Ab。同时为了提高构建的SPR生物传感器的灵敏度,使检测结果更准确,Au/Ag复合纳米粒子和三角Ag纳米片作为增敏材料被引入传感器中。本文包括以下三部分实验内容。(1)实验构建了两种SPR生物传感器——传统模式生物传感器和Au/Ag复合纳米粒子增敏的生物传感器用于检测ALV-J。前者借助Au-S键使3-巯基丙酸(MPA)在SPR裸金膜芯片上形成一层密集的自组装单分子层,通过氨基与MPA中被活化剂活化后的羧基结合使蛋白A修饰到芯片上,接着芯片被乙醇胺灭活后,ALV-J抗体的非抗原结合位点与蛋白A结合使抗体修饰到芯片上,最后实现了对ALV-J抗原的检测;后者借助Au-S键使1,6-己二硫醇(HDT)一端在裸芯片上形成一层密集的自组装单分子层,另一端借助Au-S键、Ag-S键使Au/Ag复合纳米粒子修饰到芯片上,接下来传感器修饰各种物质与检测的方法同前者。结果两种传感器均能成功检测ALV-J抗原,检测限分别是1054 TCID50·mL–1和659 TCID50·mL–1,说明将Au/Ag复合纳米粒子引入SPR生物传感器中可有效提高传感器的灵敏度。而且进行的对比实验展现了制备的传感器具有良好的特异性。(2)实验构建了一种新型的SPR生物传感器用于检测H9N2 AIV。首先借助HDT将三角Ag纳米片修饰到芯片上,然后依次在芯片上修饰MPA、蛋白A和兔抗H9N2单克隆抗体,并最终实现对H9N2 AIV及裂解AIV的检测。结果传感器能顺利检测完整的H9N2 AIV,最低检测浓度为103 ELD50·mL–1。裂解病毒的浓度在50~103 ELD50·mL–1范围内与SPR信号成线性关系,检测限为28 ELD50·mL–1(S/N=3)。另外,此SPR生物传感器还展现了良好的检测特异性。(3)实验构建了两种SPR生物传感器(传感器1和传感器2)用于检测转基因蛋白Cry1Ab。在传感器2的芯片上依次修饰HDT、Au/Ag复合纳米粒子、MPA、蛋白A和鼠抗Cry1Ab单克隆抗体,从而实现对Cry1Ab蛋白的检测。传感器1与传感器2的构建过程相比,不同点在于没有先固定蛋白A而直接固定抗体。结果这两种传感器分别在Cry1Ab蛋白的浓度为10~500 ng·mL–1和8~1000 ng·mL–1时有良好的线性响应,检测限分别为5.0 ng·mL–1和4.8 ng·mL–1(S/N=3)。同时两种生物传感器均具有较高的特异性和较好的重现性。