【摘 要】
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目的乳腺癌新辅助化疗是乳腺癌综合治疗的重要组成部分,在降低肿瘤分期、创造手术机会和提高生存率等方面具有显著作用,然而遗传性或获得性的肿瘤耐药常影响化疗疗效,导致乳腺癌治疗的失败。因此,寻找一种可以预测乳腺癌化疗敏感性的生物标记物变得尤为重要。本课题通过高通量芯片技术检测乳腺癌新辅助化疗前组织标本中lncRNA和mRNA表达水平,旨在寻找对新辅助化疗有实际作用的lncRNA,并通过探究lncRNA在
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目的乳腺癌新辅助化疗是乳腺癌综合治疗的重要组成部分,在降低肿瘤分期、创造手术机会和提高生存率等方面具有显著作用,然而遗传性或获得性的肿瘤耐药常影响化疗疗效,导致乳腺癌治疗的失败。因此,寻找一种可以预测乳腺癌化疗敏感性的生物标记物变得尤为重要。本课题通过高通量芯片技术检测乳腺癌新辅助化疗前组织标本中lncRNA和mRNA表达水平,旨在寻找对新辅助化疗有实际作用的lncRNA,并通过探究lncRNA在外泌体的介导下在乳腺癌化疗耐药的作用和机制,为乳腺癌新辅助化疗寻找有价值的疗效预测指标以及个体化的化疗方案建议。方法1.通过高通量生物芯片技术对比和分析同一个体在新辅助化疗后相较于化疗前乳腺癌组织中lncRNA、mRNA的表达水平。2.实时荧光定量PCR检测lncRNAPOU3F3在20例病理完全缓解（pCR）组织和16例非病理完全缓解（NpCR）组织标本中的表达差异。3.实时荧光定量PCR检测lncRNA POU3F3在耐药细胞株MDA-MB-231/DOX的和亲本MDA-MB-231中的表达差异。4.提取细胞上清中的外泌体,用电镜和纳米颗粒粒径检测对外泌体进行鉴定;通过荧光的直标抗体结合流式细胞仪统计出外泌体的阳性百分比,判断外泌体的纯度。5.实时荧光定量PCR检测lncRNA POU3F3在MDA-MB-231/DOX细胞外泌体与MDA-MB-231细胞外泌体中的表达差异。6.使用siRNA序列干扰lncRNA POU3F3的表达,通过细胞划痕实验检测细胞的迁移能力。结果1.基因芯片和实时荧光定量PCR均提示lncRNA POU3F3在新辅助化疗标本NpCR组的表达水平高于pCR组。2.lncRNA POU3F3在耐药细胞株MDA-MB-231/DOX的表达水平高于亲本MDA-MB-231。3.lncRNA POU3F3在MDA-MB-231/DOX细胞外泌体中的表达量高于MDA-MB-231细胞外泌体。4.干扰lncRNAPOU3F3的表达对MDA-MB-231/DOX细胞的迁移产生抑制。结论lncRNAPOU3F3可通过外泌体的介导影响乳腺癌化疗耐药的产生和发展,并且对细胞的迁移能力产生影响;lncRNA POU3F3可能成为预测乳腺癌新辅助化疗疗效的重要标志物。
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