溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus)是一种嗜盐的革兰氏阴性菌,是一种重要的条件性致病菌。由溶藻弧菌引起的疾病,给水产养殖业造成严重的经济损失。因此,溶藻弧菌的致病性引起了国内外专家的广泛研究。细菌粘附是其感染致病初始阶段的重要步骤。细菌对宿主的粘附能力受到细菌本身、粘附底物和环境因子等诸多因素的影响。细菌的粘附受多种基因调控,尽管有研究证明一些基因与细菌粘附相关,但其调控机制尚不清楚。本研究以溶藻弧菌作为研究对象,探索其粘附相关调控机制。本研究首先通过转录组测序和生物信息学分析发现鞭毛组装通路和细菌趋化通路与溶藻弧菌的粘附密切相关。通过实时荧光定量PCR(QPCR)对测序数据进行验证,结果与测序结果一致,证实了转录组测序结果的可靠性。本研究采用小干扰RNA(Short interfering RNA,siRNA)对鞭毛组装通路和细菌趋化通路中的差异表达基因(DEGs)进行瞬时基因沉默,并进行体外粘附实验。结果显示siRNA在1-6h内能够发挥基因沉默的作用,瞬时基因沉默削弱了溶藻弧菌的粘附能力。然后采用构建重组质粒法进行稳定基因沉默,通过QPCR和体外粘附实验、运动性实验、电镜实验分别从基因和表型水平检测稳定基因沉默的效果,结果表明,稳定基因沉默能够显著地削弱溶藻弧菌的粘附能力。在鞭毛组装通路中,运动性实验和电镜实验结果显示,并非所有稳定基因沉默菌株的运动性减弱,这说明运动性并不是鞭毛组装通路影响粘附的唯一方式。在细菌趋化通路中,运动性实验结果显示,所有稳定基因沉默菌株的运动性都减弱,这说明细菌趋化通路很有可能通过改变细菌的运动来调控粘附。本研究检测了细菌趋化通路中差异表达基因(DEGs)基因沉默后其上下游基因表达的变化,结果显示,溶藻弧菌粘附的基因调控机制是一个复杂的过程,其中cheV在细菌趋化通路中重要的调控作用。最后,研究了胁迫条件(温度、pH、盐度和饥饿)下细菌趋化通路中差异表达基因(DEGs)表达水平,结果显示,不同基因对不同环境胁迫有不同的响应,而相同的环境胁迫导致不同基因不同的表达变化。这预示着这些差异表达基因对环境因子很敏感,尤其是pH和饥饿处理。总之,鞭毛组装通路和细菌趋化通路不仅对环境胁迫敏感,而且在溶藻弧菌粘附过程中起重要作用。运动性并不是鞭毛组装通路影响粘附的唯一方式,而细菌趋化很有可能通过改变细菌的运动来调控粘附。